[發(fā)明專(zhuān)利]一種用于卡耶塔環(huán)孢子蟲(chóng)快速分型和溯源的定量PCR方法及試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810828293.0
• 申請(qǐng)日: 2018-07-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109136386B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-12-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馮耀宇;郭亞瓊;李娜;王元非
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/6888
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/6888;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 廣州粵高專(zhuān)利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 林麗明

1.一種用于卡耶塔環(huán)孢子蟲(chóng)的快速分型和溯源的qPCR引物，其特征在于，所述引物由上游引物Cyc-Mito-F1和下游引物Cyc-Mito-R1組成，所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1～2所示。

2.權(quán)利要求1所述的qPCR引物在非疾病治療診斷目的卡耶塔環(huán)孢子蟲(chóng)分型、溯源和快速檢測(cè)中的應(yīng)用。

3.一種非疾病治療診斷目的用于卡耶塔環(huán)孢子蟲(chóng)分型和溯源的qPCR檢測(cè)的方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1.提取DNA；

S2.以步驟S1提取的DNA為模板，用權(quán)利要求1所述qPCR引物進(jìn)行qPCR擴(kuò)增；

S3.把步驟S2中得到的qPCR擴(kuò)增產(chǎn)物，進(jìn)行擴(kuò)增曲線和熔解曲線分析，以鑒定待測(cè)樣品的基因型，進(jìn)而推測(cè)其地理來(lái)源。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述qPCR擴(kuò)增的反應(yīng)體系為包含以下終濃度的試劑：dNTPs 200 μM，MgCl₂ 3 mM，上游引物和下游引物各500 nM，1×Gene Amp PCRbuffer，1×Eva Green熒光染料，DNA聚合酶2.5 U，DNA模板1 μL，BSA 400 ng/μL。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述qPCR擴(kuò)增的反應(yīng)程序?yàn)椋?5℃ 3 min；95℃ 5 s，58℃ 15 s，72℃ 15 s，共50個(gè)循環(huán)；95℃ 10 s，48℃ 30 s，然后按0.1 ℃/s的速率從48℃升溫至95℃，每升溫0 .1℃采集一次熒光信號(hào)。

6.一種用于卡耶塔環(huán)孢子蟲(chóng)分型、溯源和快速檢測(cè)的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，包含權(quán)利要求1所述的qPCR引物。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，還包含qPCR檢測(cè)所需試劑。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，還包含陽(yáng)性和陰性對(duì)照。

9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，還包含從待測(cè)樣品中提取DNA所需的試劑。