[發(fā)明專利]一種用于癌細胞及H2

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810824041.0
• 申請日: 2018-07-25
• 公開（公告）號: CN109085158B
• 公開（公告）日: 2020-08-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鑒燕楠;葛慎光;孫曉路;王賀;趙金歌;王紹鵬;張彥;于京華;崔康
• 申請（專利權(quán)）人: 濟南大學
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76;G01N27/30;G01N27/327
• 代理公司: 濟南譽豐專利代理事務(wù)所(普通合伙企業(yè)) 37240
• 代理人: 高強

1.一種用于MCF-7癌細胞及H₂O₂檢測的紙基傳感器的構(gòu)建，其特征是包括以下步驟：

（1）在制備的紙芯片的工作區(qū)域進行AuPd納米粒子修飾；

（2）一定濃度的巰基乙胺水溶液滴加到步驟（1）處理得到的工作區(qū)域表面，后滴加20 μL氨基化的Ru@SiO₂-Au溶液；

（3）9 μL 5 μmol/L二茂鐵-DNA I滴加到步驟（2）修飾的工作區(qū)域表面，室溫，孵育24h，用磷酸緩沖鹽溶液清洗；

（4）10 μL 5.0 mmol/L刀豆球蛋白A水溶液滴加到步驟（3）修飾的工作區(qū)域表面，室溫，孵育40 min，用磷酸緩沖鹽溶液清洗，后滴加10 μL牛血清白蛋白進行細胞非活性位點封閉，室溫，孵育2 h；

（5）向步驟（4）中得到的紙芯片工作區(qū)域滴加10 μL不同濃度梯度的均勻細胞懸液，室溫，孵育1 h，用培養(yǎng)緩沖液沖洗，4 oC下放置，將磷酸鹽緩沖溶液和三丙胺混合溶液滴加到上述體系中，測量其電化學發(fā)光強度；

（6）向步驟（5）體系中加入一定量含有佛波酯的磷酸緩沖鹽溶液，測定其電化學發(fā)光強度，對比步驟（5）與步驟（6）的電化學發(fā)光強度，建立H₂O₂的濃度和癌細胞的數(shù)量與電化學發(fā)光強度關(guān)系。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于MCF-7癌細胞及H₂O₂檢測的紙基傳感器的構(gòu)建，其特征是，紙芯片的制備：利用蠟打印技術(shù)在色譜紙上打印圓形圖案，將打印蠟的圖案放在恒溫150 oC下2 min，未打印蠟的地方為親水區(qū)，三維折紙設(shè)備上的疏水屏障形狀是由Adobeillustrator CS6軟件設(shè)計的，折紙裝置由一個直徑8 mm輔助區(qū)印有銀/氯化銀參比電極、碳對電極和直徑8 mm工作區(qū)域印有碳工作電極組成，此外，沿寬度1 mm折疊線折疊。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于MCF-7癌細胞及H₂O₂檢測的紙基傳感器的構(gòu)建，其特征是，AuPd納米粒子在紙芯片的工作區(qū)域進行修飾的具體步驟如下:將80 mL 0.24 mmol/L氯金酸溶液加熱到96 oC，保持1 min，后加入2.8 mL 34 mmol/L新制的檸檬酸鈉，反應(yīng)10min，顏色變成酒紅色，Au種子溶液制備成功，取35 μL Au種子溶液滴加到工作區(qū)域的表面，室溫，平衡1 h，后用二次純水清洗，然后，2 mL 20 mmol/L四氯合鈀(II)酸水溶液，0.05 mL0.1 mol/L十八烷基三甲基氯化銨溶液和50 μL 1 mmol/L乙酸銅水溶液依次加入到3 mL~5mL 1 mmol/L氯金酸水溶液中，混合均勻，后取50 μL~80 μL上述混合溶液滴加到工作區(qū)域的表面，并快速滴加新制備的抗壞血酸水溶液，室溫，靜置2 h，后在轉(zhuǎn)速9000 rpm下，離心5min，用二次純水清洗3~4次，工作區(qū)域表面形成一層AuPd納米粒子。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于MCF-7癌細胞及H₂O₂檢測的紙基傳感器的構(gòu)建，其特征是，一定濃度的巰基乙胺水溶液滴加到步驟（1）處理得到的工作區(qū)域表面的具體步驟如下：80 μL 0.1 mol/L巰基乙胺水溶液滴在修飾有AuPd納米粒子的工作區(qū)域表面，室溫，放置2 h，用二次純水清洗。