[發明專利]一種皿培式培養牛樟芝的質量控制方法

有效

• 申請號: 201810819036.0
• 申請日: 2018-07-24
• 公開（公告）號: CN110749661B
• 公開（公告）日: 2020-08-25
• 發明（設計）人: 陳海峰;林挺;羅吉孟;田文靜;吳雨
• 申請（專利權）人: 廈門大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務所(普通合伙) 35200
• 代理人: 馬應森

一種皿培式培養牛樟芝的質量控制方法，涉及三萜類樟芝酸類化合物。配制供試品溶液；配制對照品；建立供試品HPLC指紋圖譜條件；考察系統適應性；考察一對主含量差向異構體化合物的含量；外標法確證方法準確性。提供的對照品的制備方法得純度大于98％的對照品。供試品HPLC指紋圖譜一對主含量差向異構體實現基線分離。供試品制備重現性好。供試品和對照品配制的溶液穩定性好，能用于含量測定。考察的0.1～4.8μg質量范圍內三個化合物線性法關系好，相關系數大于0.9999。質量控制方法準確性好，加樣回收率在98％～104％范圍內。對皿培式培養牛樟芝質量控制研究，解決對照品難以大量獲得及無法準確進行含量測定的問題。

技術領域

本發明涉及三萜類樟芝酸類化合物，尤其是涉及一種皿培式培養牛樟芝的質量控制方法。

背景技術

由于野生牛樟芝宿主牛樟木資源短缺和培養周期過長等一系列的原因造成了野生牛樟芝產量過少，因此需要加大對于人工培育的牛樟芝的研究。在綜合考慮多種培養方式之后，皿培式培養牛樟芝以其培養方式簡便、培養周期適中以及不需要依賴宿主牛樟木等原因而具有較好的市場應用價值。而且，皿培式培養牛樟芝與野生牛樟芝均含有大量的樟芝酸類活性成分，在藥理活性上也具有相同的作用，為皿培式牛樟芝產品的市場應用及推廣提供了基礎。

然而，由于這些三萜多存在差向異構體，如主含成分(25S)-Antcin K和(25R)-Antcin K就是一對差向異構體，在眾多對皿培式培養牛樟芝質量控制的研究中，對于牛樟芝中普遍存在的成對出現的差向異構體采用混合定量的方式([1]Lin T Y,Chen C Y,Chien S C,et al.Metabolite profiles for Antrodia cinnamomea fruiting bodiesharvested at different culture ages and from different wood substrates[J].JAgric Food Chem,2011,59(14):7626-35)，并且在HPLC指紋圖譜中定量組分沒有達到基線分離([2]Y-M T.Method for HPLC anlysis of tritepenoids from antrodia campphora[J])。在其它中藥的差向異構體的文獻報道中發現，α-甘草酸和β-甘草酸這對差向異構體在體內轉化成甘草次酸的主要藥代動學參數也存在明顯的差異([3]張秋峰,陳曉輝,易麗昕,等.甘草酸差向異構體在大鼠體內的藥動學研究[J].中南藥學,2010,8(5):350-53)。20(S/R)-原人參二醇這對差向異構體在大鼠膽汁排泄累積量的研究表明，R構型的膽汁排泄量是是S構型的5.4倍，表現出明顯的立體選擇性([4]吳祥猛,王莉,倪瑩瑩,等.20(S)-原人參二醇奧克梯隆型差向異構體大鼠排泄研究[J].中國中藥雜志,2014,39(7):1306-10)。因此有必要對皿培式牛樟芝中主含成分(25S)-Antcin K和(25R)-Antcin K這一對差向異構體分別進行定量研究。

發明內容

本發明的目的在于提供一種皿培式培養牛樟芝的質量控制方法。

本發明解決對于皿培式培養牛樟芝中，對差向異構體多采用混合定量的方式，并沒有對差向異構體進行拆分以及分別定量等問題，提供以較易獲得的化合物(25R)-AntcinC為內參物，來測定難以大量制備獲得的一對主含差向異構體(25S)-Antcin K和(25R)-Antcin K的含量，化合物核磁數據見表1(25S)-Antcin K和(25R)-Antcin K的核磁數據和表2(25S)-Antcin K的核磁數據：

表1(25S)-Antcin K和(25R)-Antcin K的核磁數據

表2(25S)-Antcin K的核磁數據

本發明包括以下步驟：

1)配制供試品溶液；