[發(fā)明專利]一種油用牡丹愈傷組織培養(yǎng)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810814581.0
• 申請(qǐng)日: 2018-07-23
• 公開（公告）號(hào): CN109042320B
• 公開（公告）日: 2022-02-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊萬明;王敏;張謹(jǐn)華;陳林晶;馬建華;楊艷君
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 晉中學(xué)院
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 西安銘澤知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 61223
• 代理人: 俞曉明

本發(fā)明屬于植物愈傷組織培育技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種油用牡丹愈傷組織培養(yǎng)方法。該方法取油用牡丹葉片，洗凈，消毒，得到無菌葉片；然后將無菌葉片沿葉片主脈方向切開，即每個(gè)葉片均分成兩半，再進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)和增殖培養(yǎng)，分別在誘導(dǎo)培養(yǎng)基和增殖培養(yǎng)基中添加了生姜汁。本發(fā)明的方法以油用牡丹葉子為對(duì)象，成功培育出油用牡丹愈傷組織，為油用牡丹再生體系的建立奠定了試驗(yàn)基礎(chǔ)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物愈傷組織培育技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種油用牡丹愈傷組織培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)

目前我國(guó)野生牡丹品種主要分布在河南、陜西、湖北、甘肅、四川、云南、西藏等地。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，大約有100多種具有結(jié)實(shí)能力。油用牡丹是指子實(shí)產(chǎn)量高、含油量高、有效成分高的牡丹品種類型。鳳丹牡丹和紫斑牡丹籽中不飽和脂肪酸含量超過90％，其中亞麻酸含量占40％左右。亞麻酸是人力必需氨基酸，具有提神醒腦、增強(qiáng)記憶、降血脂、降血壓、預(yù)防心腦血管疾病等功效，對(duì)人類健康起著關(guān)鍵作用。因此油用牡丹的大量培養(yǎng)不僅具有較佳的觀賞效果，還具有很高的藥用價(jià)值。傳統(tǒng)油用牡丹的種植方法主要是種子繁殖和分株繁殖，培養(yǎng)過程中耗時(shí)長(zhǎng)。

組織培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)的植株能生長(zhǎng)健壯，葉片濃綠，且能有效改變果實(shí)品質(zhì)，提高產(chǎn)量，繁殖快，且不受季節(jié)約束。常見的組織培養(yǎng)技術(shù)是愈傷組織培養(yǎng)，比如南果梨、油用牡丹、胡蘿卜等均可用于愈傷組織培養(yǎng)，但是由于油用牡丹的品種較少，傳統(tǒng)的植物愈傷組織誘導(dǎo)及繼代激素配比并不適用于所有植物的愈傷組織培養(yǎng)，目前尚未發(fā)現(xiàn)使用油用牡丹進(jìn)行愈傷組織培養(yǎng)的方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種油用牡丹愈傷組織培養(yǎng)方法，該方法以油用牡丹葉子為對(duì)象，成功培育出油用牡丹愈傷組織，為油用牡丹再生體系的建立奠定了試驗(yàn)基礎(chǔ)。

本發(fā)明提供的一種油用牡丹愈傷組織培養(yǎng)方法，包括以下步驟：

S1，取油用牡丹葉片，洗凈，消毒，得到無菌葉片；

S2，誘導(dǎo)：將無菌葉片沿葉片主脈方向切開，即將每個(gè)葉片分成兩半，將切開后的葉片接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，25±2℃培養(yǎng)，直至長(zhǎng)出愈傷組織，得到葉片愈傷組織；

所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基按以下方法配制：1L水中加入4.74g MS固體培養(yǎng)基、20g蔗糖，加熱溶解，調(diào)pH至5.8～6.0，然后加入0.1mg的NAA、10～20ml生姜汁、6～8g瓊脂，煮沸至瓊脂完全溶解，滅菌；

S3，增殖：取出葉片愈傷組織，切塊，置于增殖培養(yǎng)基中，25±2℃培養(yǎng)，直至獲得白色疏松油用牡丹葉片愈傷組織；

所述增殖培養(yǎng)基按以下方法配制：1L水中加入4.74g MS固體培養(yǎng)基、30g蔗糖，加熱溶解，調(diào)pH至5.8～6.0，然后加入2mg的6-BA、10～20ml生姜汁、6～8g瓊脂，煮沸至瓊脂完全溶解，滅菌；

其中，S2和S3中所述生姜汁按照以下方法制備而成：生姜切片后與水按照20g:200ml的比例混合，煮沸5～10min，過濾后收集的濾液為生姜汁。

優(yōu)選的，上述油用牡丹愈傷組織培養(yǎng)方法，S1中，消毒的具體方式如下：將洗凈的油用牡丹葉片用體積分?jǐn)?shù)75％乙醇溶液浸泡消毒，無菌水沖洗，再放入0.1g/100ml的HgCl₂溶液浸泡消毒8min，取出葉片并用無菌水沖洗，吸干水分取出，得到無菌葉片。

優(yōu)選的，上述油用牡丹愈傷組織培養(yǎng)方法，S1中，洗凈油用牡丹葉片沿主脈方向的長(zhǎng)度為2～6cm。

優(yōu)選的，上述油用牡丹愈傷組織培養(yǎng)方法，S1中，S2和S3中所述生姜片的厚度為2～4mm。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供的油用牡丹愈傷組織培養(yǎng)方法，具有以下有益效果：