[發(fā)明專利]煙粉虱MANF基因或其表達(dá)的蛋白作為靶點(diǎn)在制備防治煙粉虱的藥物中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810813628.1
• 申請(qǐng)日: 2018-07-23
• 公開（公告）號(hào): CN108925783B
• 公開（公告）日: 2021-09-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王曉偉;錢力鑫
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/113
• 分類號(hào): C12N15/113;A23K50/90;A23K20/153;C12N15/87;A01K67/033
• 代理公司: 杭州天勤知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33224
• 代理人: 胡紅娟

本發(fā)明公開了一種煙粉虱MANF基因或其表達(dá)的蛋白作為靶點(diǎn)在制備防治煙粉虱的藥物中的應(yīng)用；并提供了抑制MANF基因表達(dá)的dsRNA，其正義鏈的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示，反義鏈的核苷酸序列為SEQ ID NO.1所示的序列的反向互補(bǔ)序列。本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)MANF基因在防治煙粉虱中的作用，通過RNAi技術(shù)獲得MANF基因的dsRNA，并通過飼喂方式沉默MANF基因后，能夠有效降低對(duì)煙粉虱成蟲的存活率。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因工程技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及煙粉虱MANF基因或其表達(dá)的蛋白作為靶點(diǎn)在制備防治煙粉虱的藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

煙粉虱屬半翅目Hemiptera，是粉虱科Aleyrodidae的一類刺吸式口器的小型昆蟲，又名棉粉虱或甘薯粉虱，寄主范圍十分廣泛，主要危害十字花科、茄科、葫蘆科、豆科、菊科、錦葵科等植物，廣泛分布于熱帶、亞熱帶及低緯度溫帶地區(qū)，是棉花、番茄、煙草等許多經(jīng)濟(jì)作物的重要害蟲。

煙粉虱不僅通過刺吸植物汁液危害植物，導(dǎo)致植物萎焉枯死；還可以傳播200多種植物病毒，導(dǎo)致作物病毒病流行和暴發(fā)成災(zāi)。由于入侵煙粉虱生活史短、繁殖能力強(qiáng)、適應(yīng)環(huán)境能力強(qiáng)，已經(jīng)成為我國農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上非常難治理的一類害蟲，造成農(nóng)業(yè)上巨大損失。

煙粉虱和寄主植物之間的相互作用是非常復(fù)雜的。在長(zhǎng)期的協(xié)同進(jìn)化過程中，植物逐漸形成了一套組成性和誘導(dǎo)性的防御機(jī)制來應(yīng)對(duì)煙粉虱取食，而煙粉虱也進(jìn)化出多種行為和生理機(jī)制以應(yīng)對(duì)植物的防御，從而適應(yīng)多種寄主植物，順利成活。

中腦星形膠質(zhì)細(xì)胞衍生神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子基因(MANF)，在進(jìn)化上高度保守，廣泛分布于生物體內(nèi)。在細(xì)胞外，MANF作為一種分泌蛋白，具有保護(hù)細(xì)胞促進(jìn)神經(jīng)元修復(fù)的功能；在細(xì)胞內(nèi)，MANF主要位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔，對(duì)于維持內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的穩(wěn)態(tài)具有重要意義。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是真核細(xì)胞中重要的細(xì)胞器，參與蛋白質(zhì)的合成、加工及轉(zhuǎn)運(yùn)過程，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的穩(wěn)態(tài)在生物體維持正常運(yùn)轉(zhuǎn)過程中起著非常重要的作用。所述，研究MANF基因在煙粉虱生長(zhǎng)發(fā)育過程中的作用，能為深入了解煙粉虱和植物互作的分子機(jī)制提供基礎(chǔ)，為研究煙粉虱防治新策略提供理論依據(jù)。

RNA干擾是指內(nèi)源性或外源性的dsRNA介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)mRNA發(fā)生特異性降解，從而導(dǎo)致靶細(xì)胞表達(dá)沉默。近些年，RNA干擾(RNA interference)技術(shù)在昆蟲的研究上得到越來越多的應(yīng)用，通過RNAi技術(shù)沉默昆蟲體內(nèi)某些基因，使昆蟲的某些能力增強(qiáng)或者喪失，也能在特定時(shí)間抑制其功能基因表達(dá)使昆蟲的發(fā)育停留在某個(gè)階段，進(jìn)而達(dá)到利用或防治其危害的目的。

目前，利用RNAi技術(shù)進(jìn)行害蟲防治已有報(bào)道，Baum等(2007)證明v-ATPase對(duì)玉米根螢葉甲(Western corn rootworm WCR Diabrotica virgifera virgifera LeConte)有致死效果，可以用于田間防治；同年，mao等通過將P450的dsRNA導(dǎo)入棉花中，可以導(dǎo)致棉鈴蟲(cotton bollworm Helicoverpa armigera)死亡；Tian(2009)證實(shí)通過飼喂的方法可以導(dǎo)致甜菜夜蛾(Spodoptera exigua(Hübner))的死亡，一系列的現(xiàn)有技術(shù)都表明，RNAi技術(shù)作為一種新型的害蟲防治方法是可行的。但是，針對(duì)于煙粉虱的有效的靶標(biāo)基因還未見報(bào)道。因此，深入研究影響煙粉虱存活的關(guān)鍵基因，以該基因作為防治煙粉虱的靶標(biāo)基因是非常有必要的。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種煙粉虱MANF基因或其表達(dá)的蛋白作為靶點(diǎn)在制備防治煙粉虱的藥物中的應(yīng)用以及煙粉虱MANF基因的dsRNA及其應(yīng)用。

具體內(nèi)容如下：

煙粉虱MANF基因或其表達(dá)的MANF蛋白作為靶點(diǎn)在制備防治煙粉虱的藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明所述提供的dsRNA，由兩條互補(bǔ)的序列組成，正義鏈的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，反義鏈的核苷酸序列為SEQ ID NO.1所示序列的反向互補(bǔ)序列。