[發(fā)明專利]一種細(xì)胞去核顯微操作針及一種細(xì)胞去核的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810811530.2
• 申請(qǐng)日: 2018-07-23
• 公開（公告）號(hào): CN108823067B
• 公開（公告）日: 2023-08-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 杜衛(wèi)華;崔立欣
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所
• 主分類號(hào): C12M1/00
• 分類號(hào): C12M1/00
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所 11569
• 代理人: 劉奇

本發(fā)明提供了一種細(xì)胞去核顯微操作針及一種細(xì)胞去核的方法，屬于細(xì)胞核移植技術(shù)領(lǐng)域，所述細(xì)胞去核顯微操作針，包括順次連接的針尖部分、第一針管、第二針管和第三針管；所述針尖部分的長度為40～50μm；所述針尖部分的外徑自針尖前端至針尖尾端逐漸增大；所述針尖前端外徑為1μm，所述針尖尾端外徑為3～5μm；所述針尖部分為實(shí)心。所述第一針管和第三針管為直管；所述第二針管為彎管。本發(fā)明所述的細(xì)胞去核顯微操作針進(jìn)行卵母細(xì)胞的去核，去核時(shí)間短、去核率高，操作簡單，去核后卵母細(xì)胞的存活率高，核移植重構(gòu)胚的發(fā)育率高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于細(xì)胞核移植技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種細(xì)胞去核顯微操作針及一種細(xì)胞去核的方法。

背景技術(shù)

哺乳動(dòng)物的體細(xì)胞核移植，即體細(xì)胞克隆是近代生物技術(shù)和生命科學(xué)領(lǐng)域的一項(xiàng)具有劃時(shí)代意義的重大突破，它證明了分化的體細(xì)胞能恢復(fù)其未分化狀態(tài)，并發(fā)育為一個(gè)完整的個(gè)體。該技術(shù)在多種哺乳動(dòng)物都獲得成功，在家畜的遺傳改良、乳腺生物反應(yīng)器的制備和人類治療性克隆等發(fā)明都具有廣闊的應(yīng)用前景。在體細(xì)胞核移植的程序中，卵母細(xì)胞核物質(zhì)的去除，即去核是影響核移植總效率的重要技術(shù)環(huán)節(jié)之一。卵母細(xì)胞去核不完全將導(dǎo)致核移植重構(gòu)胚中染色體倍數(shù)異常，最終胚胎因發(fā)育受阻而流產(chǎn)或死亡；另外卵母細(xì)胞能否耐受物理去核帶來的機(jī)械損傷也嚴(yán)重影響著去核率。

目前核移植中普遍使用的去核方法是機(jī)械去核法，即通過顯微操作機(jī)械性的去除卵母細(xì)胞中的核染色質(zhì)，主要包括盲吸法、半卵去核法、切割去核法和高速離心去核法等。機(jī)械的去核方法都存在較高的技術(shù)要求，如果方法選擇不當(dāng)或操作不熟練，可能會(huì)對(duì)受體細(xì)胞質(zhì)的微結(jié)構(gòu)造成嚴(yán)重傷害；且操作時(shí)間較長，進(jìn)而產(chǎn)生活性氧等有害物質(zhì)，影響重組胚的發(fā)育。在機(jī)械去核中，去核針的選取對(duì)于去核率、操作時(shí)間和去核后卵母細(xì)胞的存活率有較大的影響。常用的去核針存在以下缺點(diǎn)：1.均為空心針，針的韌性降低，易折斷。2.若針尖較小，在吸取含細(xì)胞核的卵胞質(zhì)時(shí)極易堵塞針管，需頻繁換陣，去核操作時(shí)間加長，效率低；若針尖較粗(為20μm左右)時(shí)，吸取的卵胞質(zhì)較多，導(dǎo)致存在于胞質(zhì)中的核重編程相關(guān)因子的丟失嚴(yán)重，進(jìn)而重構(gòu)胚的核重編程不完全和表觀遺傳遺傳，胚胎的正常發(fā)育受阻。3.去核針鋒利的切口，會(huì)破壞卵母細(xì)胞的細(xì)胞骨架和胞質(zhì)膜等顯微結(jié)構(gòu)，造成卵母細(xì)胞的死亡和胚胎的發(fā)育停滯。4.使用針尖切口較小的去核針則需要兩步操作，如擠壓去核法，先將去核針扎入極體附近的透明帶和卵胞質(zhì)間的卵周隙中，在透明帶形成切口后移出去核針；再將去核針移到卵母細(xì)胞上方，向下輕輕擠出極體及其周圍的胞質(zhì)；點(diǎn)擊去核則是透明帶切口后，用去核針點(diǎn)擊卵母細(xì)胞透

明帶一側(cè)，達(dá)到去核目的。擠壓法對(duì)細(xì)胞造成的傷害較小，操作耗時(shí)短，整體去核效率較高；而點(diǎn)擊法在用去核針直接點(diǎn)擊透明帶時(shí)，去核針尖很容易進(jìn)入透明帶中，造成受體細(xì)胞的崩潰，同時(shí)也浪費(fèi)操作時(shí)間。若用鈍性的針去點(diǎn)擊透明帶，取得了較好的效果，但操作過程需要換針，耗時(shí)長，影響操作速度?？傊F(xiàn)有的去核針去核率低，對(duì)卵母細(xì)胞有較大的破壞，操作復(fù)雜，易斷針。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明提供一種去核率高、操作簡單、對(duì)卵母細(xì)胞損傷小的細(xì)胞去核顯微操作針及細(xì)胞去核方法。

基于上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供了以下技術(shù)方案：一種細(xì)胞去核顯微操作針，包括順次連接的針尖部分、第一針管、第二針管和第三針管；所述針尖部分的長度為40～50μm；所述針尖部分的外徑自針尖前端至針尖尾端逐漸增大；所述針尖前端外徑為1μm，所述針尖尾端外徑為3～5μm；所述針尖部分為實(shí)心；所述第一針管和第三針管為直管；所述第二針管為彎管。

優(yōu)選的，所述第一針管的長度為40～60μm；所述第一針管的外徑為25～30μm。

優(yōu)選的，所述第一針管為實(shí)心。

優(yōu)選的，所述第二針管內(nèi)設(shè)置角度為145～155°的彎曲拐點(diǎn)。

優(yōu)選的，所述彎曲拐點(diǎn)設(shè)置在距第二針管與第一針管連接點(diǎn)1000～1800μm處。

優(yōu)選的，第二針管內(nèi)部自所述第二針管與第一針管連接點(diǎn)至所述彎曲拐點(diǎn)部分的外徑為25～30μm。