[發明專利]一種高純度核苷酸的精制方法

有效

• 申請號: 201810809966.8
• 申請日: 2018-07-23
• 公開（公告）號: CN108892699B
• 公開（公告）日: 2021-07-30
• 發明（設計）人: 邱蔚然;杜衛群;徐浩;程洪杰;余偉群
• 申請（專利權）人: 南通秋之友生物科技有限公司
• 主分類號: C07H19/20
• 分類號: C07H19/20;C07H19/10;C07H1/06
• 代理公司: 上海微策知識產權代理事務所(普通合伙) 31333
• 代理人: 李萍

本發明提供一種高純度核苷酸的精制方法，至少包括以下步驟：(1)一次精制：向反應器中加入核苷酸粗品、溶劑，調節pH7.0?9.0，升溫至50?70℃，加入脫色劑，保溫反應0.5?1h，過濾，然后將濾液降溫至室溫，得到核苷酸一次精制溶液；(2)二次精制：將步驟(1)中得到的核苷酸一次精制溶液經過強堿性陰離子交換樹脂柱處理；然后用頂洗液洗脫，收集二次精制溶液；(3)結晶：向步驟(2)中得到的二次精制溶液中加入鹽析劑、有機溶劑，進行結晶，過濾，淋洗，干燥，得到高純度核苷酸；其得到的核苷酸純度高、收率高、雜質少。

技術領域

本發明涉及產品精制技術領域，具體地，本發明涉及一種高純度核苷酸的精制方法。

背景技術

鳥苷酸或腺苷酸、胞苷酸、尿苷酸、肌苷酸可以通過發酵、RNA酶解和化學合成等方法制得。它們可應用于醫藥、營養強化劑和食品添加劑等領域，特別是鳥苷酸二鈉和肌苷酸二鈉已廣泛應用于食品鮮味劑，用量也較大。鳥苷酸或腺苷酸、胞苷酸、尿苷酸、肌苷酸等核苷酸的生產技術已較成熟，但在產品質量方面尚存色澤、純度等缺陷。特別是發酵或RNA酶解獲得的產品，往往含有色素等較難去除的雜質而影響產品的質量。

關于發酵或酶法生產核苷酸分離純化方法，專利號為CN101993466公開了一種5’-鳥苷酸二鈉的制備方法，通過用強堿陰離子交換樹脂分離純化的方法，其目的是應用樹脂將鳥苷酸二鈉與鳥苷或鳥苷衍生物分開，離子交換吸附，然后解析。專利號為CN1177859公開了用陰離子交換樹脂從核糖核酸酶解液中分離核苷酸的方法，其應用樹脂將4種核苷酸分離純化，通過交換吸附解析，獲得單一核苷酸。專利號CN105348347公開了5’-鳥苷酸二鈉的精制方法，其方法比較繁瑣，應用30-35％鹽酸和0.1-1.0mol/L氯化鈉混合液洗脫，GMP在酸性條件下不穩定；在這樣高濃度鹽酸下，鳥苷酸二鈉會分解成鳥苷和鳥嘌呤等，另外改用0.1-1.0mol/L氯化鈉洗脫，色素也將5’-鳥苷酸二鈉同時洗脫下來，不能達到去除色素的目的。

色素的去除一般可采用活性炭脫色，以及大孔樹脂、脫色樹脂等方法。但是對于發酵或RNA酶解獲得的5’-鳥苷酸二鈉產品，其它種種方法都不能獲得理想效果，例如采用常用活性炭必須在酸性條件下脫色，而5’-鳥苷酸二鈉在pH3-4 左右會形成凝膠狀物質，而無法操作。

因此，針對上述問題，本發明提供一種高純度核苷酸的精制方法，其得到的核苷酸純度高、收率高、雜質少。

發明內容

本發明針對目前生產工藝中存在的問題提出以下解決方案。從發酵法獲得核苷酸主要存在色素、核苷等雜質。從RNA降解獲得核苷酸主要存在色素、其他核苷酸等雜質。

針對上述問題，本發明提供一種高純度核苷酸的精制方法，至少包括以下步驟：

(1)一次精制：向反應器中加入核苷酸粗品、溶劑，調節pH7.0-9.0，升溫至50-70℃，加入脫色劑，保溫反應0.5-1h，過濾，然后將濾液降溫至室溫，得到核苷酸一次精制溶液；

(2)二次精制：將步驟(1)中得到的核苷酸一次精制溶液經過強堿性陰離子交換樹脂柱處理；然后用頂洗液洗脫，收集二次精制溶液；

(3)結晶：向步驟(2)中得到的二次精制溶液中加入鹽析劑、有機溶劑，進行結晶，過濾，淋洗，干燥，得到高純度核苷酸。

在一種實施方式中，所述步驟(1)中脫色劑包括醫用活性炭、活性炭301、活性炭303中一種。

在一種實施方式中，所述步驟(2)中強堿性陰離子交換樹脂柱裝填的強堿性陰離子交換樹脂為201強堿性陰離子交換樹脂、Amberlite IRA-400陰離子交換樹脂、DIAIONHP20陰離子交換樹脂、PA312陰離子交換樹脂、胍基強堿陰離子交換樹脂。

在一種實施方式中，所述步驟(2)中核苷酸一次精制溶液與所述強堿性陰離子交換樹脂的配比為(0.3-2)：1；核苷酸質量以Kg計，陽離子交換樹脂體積以L計。