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[發明專利]棒狀桿菌基因JNy31014在提高L-賴氨酸產量中的應用有效

專利信息
申請號: 201810806965.8 申請日: 2018-07-21
公開(公告)號: CN109762779B 公開(公告)日: 2021-05-28
發明(設計)人: 汪俊卿;薛樂;王瑞明;范翰;李丕武;修翔;張麗華;王松江;王建彬;郭傳莊;隋松森 申請(專利權)人: 齊魯工業大學;諸城東曉生物科技有限公司
主分類號: C12N15/77 分類號: C12N15/77;C12N1/21;C12P13/08;C12R1/15
代理公司: 濟南竹森知識產權代理事務所(普通合伙) 37270 代理人: 朱家富
地址: 250353 山東*** 國省代碼: 山東;37
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摘要:
搜索關鍵詞: 桿菌 基因 jny31014 提高 賴氨酸 產量 中的 應用
【權利要求書】:

1.一種利用谷氨酸棒狀桿菌生產L-賴氨酸的方法,其特征在于,通過利用谷氨酸棒狀桿菌發酵制備L-賴氨酸,所述谷氨酸棒狀桿菌的構建步驟如下:

(1)提取谷氨酸棒狀桿菌(Corynebacterium glutamicum)基因組DNA,PCR擴增,制得棒狀桿菌基因JNy31014的同源臂序列;所述棒狀桿菌基因JNy31014的序列如SEQ ID NO.1所示;

所述PCR擴增的引物核苷酸序列如下:

F1:CGCGAATTCCACTTATCAGCCTCAACACTCC

R1:AGGCCAGCAAAAGTTTCTTATGCAACGCCCACC;

(2)制備抗性標簽Cmr片段,然后將步驟(1)制得的同源臂序列與抗性標簽Cmr片段鏈接,制得融合基因片段;

(3)制備谷氨酸棒狀桿菌(Corynebacterium glutamicum)感受態細胞;

(4)將步驟(2)制得的融合基因片段轉化步驟(3)制得的感受態細胞,經復蘇、篩選目的基因成功整合到谷氨酸棒狀桿菌基因組的陽性克隆,即得;

所述谷氨酸棒狀桿菌為谷氨酸棒狀桿菌(Corynebacterium glutamicum)CICC23604。

2.如權利要求1所述的方法,其特征在于,所述步驟(2)中,Cmr片段來源于穿梭質粒pHT01。

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