[發明專利]酸性海藻糖酶TreA及其基因和應用

在審

• 申請號: 201810798417.5
• 申請日: 2018-07-19
• 公開（公告）號: CN108841808A
• 公開（公告）日: 2018-11-20
• 發明（設計）人: 羅會穎;姚斌;蔣肖;涂濤;黃火清;蘇小運;王亞茹;王苑;柏映國;孟昆
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院飼料研究所
• 主分類號: C12N9/24
• 分類號: C12N9/24;C12N15/56;C12N15/81;C12N1/19;C12P19/14;C12P19/02;C12R1/84
• 代理公司: 北京法思騰知識產權代理有限公司 11318
• 代理人: 高宇

本發明屬于農業基因技術領域，具體涉及一種來源于真菌的酸性海藻糖酶及其基因和應用。本發明的海藻糖酶TreA的氨基酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示。本發明提供了一個新的海藻糖酶基因，其編碼的海藻糖酶具有良好的性質，可以應用于昆蟲防治、食品、淀粉糖、醫藥等工業。

技術領域

本發明屬于農業基因技術領域，具體涉及一種來源于真菌的酸性海藻糖酶及其基因和應用。

背景技術

海藻糖是一種非還原性二糖，由兩分子葡萄糖以α,α-1,1-糖苷鍵的連接形成，它的分子式為C₁₂H₂₂O₁₁，分子量大小為342.31，通常以二水化合物的形式存在。海藻糖在自然界中廣泛存在，包括植物、藻類、真菌、細菌、昆蟲等多種物種體內，被海藻糖酶分解成葡萄糖為機體提供能量。

海藻糖酶來源主要分為三類：第一類來源于細菌；第二類來源于植物和動物；第三類來源于真菌。根據酶催化反應的最適pH值，將真菌來源的海藻糖酶分為兩種：一種是酸性海藻糖酶，一種是中性海藻糖酶。中性海藻糖酶存在于細胞內，受胞內磷酸化調控，但是它的耐熱性不好。酸性海藻糖酶存在于細胞膜上，不受磷酸化的調控，它的耐熱性比較好。

海藻糖酶可以廣泛應用于食品、臨床醫療、害蟲防治等產業，因此，海藻糖酶的性質改良及作用機制的研究成為一個熱點。現有的海藻酶比活低，且pH范圍窄,不能滿足現代產業的要求。

發明內容

為了解決現有的海藻酶不能滿足現代產業需求的問題，本發明提供一種來源于真菌的酸性海藻糖酶，其具有優良的酶學性能，可以滿足現代產業的要求。

本發明的目的在于提供一種海藻糖酶TreA。

本發明的再一目的在于提供編碼上述海藻糖酶的基因。

本發明的再一目的在于提供含有上述基因的重組菌株。

本發明的再一目的在于提供上述海藻糖酶的制備方法。

本發明的再一目的在于提供上述海藻糖酶的應用。

本發明提供一種海藻糖酶TreA，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示：

其中，該酶全長1024個氨基酸，N端21個氨基酸為信號肽序列“MLVHTVVWLGVFLAFPGFTSA”。

因此，成熟的海藻糖酶TreA的理論分子量為112kDa，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示：

該海藻糖酶的最適pH為4.0，在pH 1.0-pH 9.0范圍內，該酶能夠維持其79％以上的酶活力；最適溫度為60℃，在65℃下處理1h，可以保持70％酶活力，在70℃下處理30min，能夠保持40％的酶活力，在80℃時依然具有30％的酶活力，因此，具有良好的穩定性。

本發明還提供了海藻糖酶TreA的cDNA，全長為3075bp，cDNA序列如SEQ ID NO.3所示：

其中，信號肽的堿基序列為：“ATGCTAGTCCACACTGTGGTATGGCTAGGAGTGTTCCTGGCCTTCCCCGGATTTACCTCGGCG”。因此，成熟基因的編碼序列為SEQ ID NO.4所示：

成熟蛋白理論分子量為109.6kDa，此酶屬于糖苷水解酶65家族。