[發明專利]以桿狀病毒為載體的抗神經壞死病毒浸泡疫苗及其制備方法

有效

• 申請號: 201810797600.3
• 申請日: 2018-07-19
• 公開（公告）號: CN108904792B
• 公開（公告）日: 2021-10-08
• 發明（設計）人: 謝俊鋒;黃潤慶;張靜;何建國
• 申請（專利權）人: 中山大學
• 主分類號: A61K39/12
• 分類號: A61K39/12;A61P31/14;C12N15/866;C12N7/01;A61D7/00
• 代理公司: 廣州新諾專利商標事務所有限公司 44100
• 代理人: 劉婉

本發明提供了一種以桿狀病毒為載體的抗神經壞死病毒浸泡疫苗，其包括在桿狀病毒的外膜上表達神經壞死病毒衣殼蛋白的外凸結構域的重組桿狀病毒。本發明的抗神經壞死病毒浸泡疫苗能有效的刺激魚類的先天性免疫系統，有效防治神經壞死病毒、安全性高。

技術領域

本發明屬于生物醫藥領域，具體涉及一種以桿狀病毒為載體的抗神經壞死病毒浸泡疫苗及其制備方法。

背景技術

神經壞死病毒(nervous necrosis virus，NNV)主要侵染仔魚、稚魚和部分幼魚，一旦爆發致死率接近100％。然而仔稚魚由于體型小、攝食不均勻等特點，決定該階段防治NNV所用疫苗不能運用注射和投喂的方式，因此急需一種能通過浸泡方式進行免疫的疫苗。

發明內容

本發明的目的是針對以上要解決的技術問題，提供一種能夠有效對仔稚魚進行防治神經壞死病毒的浸泡疫苗。

本發明的另一個目的是提供所述浸泡疫苗的制備方法。

為了實現以上目的，本發明提供了一種以桿狀病毒為載體的抗神經壞死病毒浸泡疫苗，其中所述抗神經壞死病毒浸泡疫苗包括由神經壞死病毒衣殼蛋白(capsid protein，CP)的外凸結構域(Protrusion domain，P domain)展示在桿狀病毒的外膜上而成的重組桿狀病毒。

優選地，所述抗神經壞死病毒浸泡疫苗還包括添加劑，例如但不限于疫苗佐劑、防腐劑、穩定劑、用于調節疫苗pH和/或等滲性的物質、或其組合。

優選地，所述桿狀病毒為苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒(Autographacalifornica multiple nuclear polyhedrosis virus，AcMNPV)。

優選地，所述抗神經壞死病毒浸泡疫苗適用于多種可感染神經壞死病毒的動物，特別是魚類，更特別是海水魚類，包括但不限于石斑魚或卵形鯧鲹。

本發明還提供了所述抗神經壞死病毒浸泡疫苗的制備方法，其包括以下步驟：

(1)以神經壞死病毒基因組為模板，以RT-PCR方式擴增獲得神經壞死病毒衣殼蛋白的外凸結構域P domain基因編碼序列，并帶上EcoR I和Hind III酶切位點，克隆至質粒pFastBacHT A；

(2)擴增流感病毒神經氨酸酶的N端前40個氨基酸殘基NA40的基因編碼序列和linker(GGGGS)₃的編碼序列，通過Nco I和EcoR I酶切位點插入所述質粒pFactbacHT A，制得含有啟動子P_PH、NA40基因編碼序列、linker(GGGGS)₃編碼序列和P domain基因編碼序列的重組桿狀病毒。

優選地，所述抗神經壞死病毒浸泡疫苗的制備方法還包括培養并生產重組桿狀病毒。更優選地，用重組桿狀病毒感染Sf9細胞進行生產。

優選地，擴增神經壞死病毒衣殼蛋白的外凸結構域P domain基因編碼序列的引物如下：

F1：GGAATTCACACCTGAAGAGACCACCGCTC；

R2：CCCAAGCTTTTAGTTTTCCGAGTCAACCCTG。

優選地，擴增流感病毒神經氨酸酶的N端前40個氨基酸殘基NA40的基因編碼序列的引物如下：

F3：CATGCCATGGATATGAATCCAAATCAAAAAATAATAACCATTG；

R4：GGAATTCGCTGCCGCCACCGCCGCTTCC。