[發(fā)明專利]一種海參體腔液及其在制備海洋無脊椎動物細胞培養(yǎng)基中的應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810795171.6
• 申請日: 2018-07-19
• 公開（公告）號: CN109022347A
• 公開（公告）日: 2018-12-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王天明;楊靜文
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江海洋大學(xué)
• 主分類號: C12N5/07
• 分類號: C12N5/07
• 代理公司: 杭州千克知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33246
• 代理人: 黃周榮

本發(fā)明公開了一種海參體腔液及其在制備海洋無脊椎動物細胞培養(yǎng)基中的應(yīng)用。該海參體腔液由以下方法制備而成：(1)選取健康的海參，收集體腔原液；(2)去除體腔原液中的免疫分子、細胞、微生物，獲得所述的海參體腔液。本申請開發(fā)經(jīng)濟水產(chǎn)動物海參的加工副產(chǎn)物體腔液生物質(zhì)資源，通過一系列加工處理，制備了用于培養(yǎng)海洋無脊椎動物細胞的天然培養(yǎng)基，可替代血清應(yīng)用，并且適用于海洋無脊椎動物細胞的長期培養(yǎng)，不僅為海洋無脊椎動物細胞培養(yǎng)提供支持，具有很高的科學(xué)價值和經(jīng)濟價值；而且還實現(xiàn)了廢物利用，海參體腔液的制備成本遠遠低于牛血清的制備成本，從而也大大降低了海洋無脊椎動物細胞培養(yǎng)基的制備成本。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于海洋無脊椎動物細胞培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種海參體腔液及其在制備海洋無脊椎動物細胞培養(yǎng)基中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

目前動物細胞培養(yǎng)基的組成成分主要包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清以及細胞因子等其他調(diào)控成分，其中血清是細胞培養(yǎng)中必不可少的營養(yǎng)及細胞調(diào)控因子來源。目前用于培養(yǎng)陸地哺乳動物、昆蟲等細胞的培養(yǎng)基已經(jīng)比較成熟，但海洋無脊椎動物細胞與陸地動物細胞之間存在物種差異，并且海洋無脊椎動物所生存的海水環(huán)境也會導(dǎo)致細胞對生存環(huán)境的要求有較大差異，因此導(dǎo)致海洋無脊椎動物細胞的培養(yǎng)條件與目前成熟的陸地哺乳動物、昆蟲等細胞的培養(yǎng)條件差異較大，而目前尚未形成穩(wěn)定有效、可用于長期傳代培養(yǎng)操作的培養(yǎng)基配方，傳統(tǒng)陸地動物細胞培養(yǎng)基中的血清成分無法較好地應(yīng)用于海洋無脊椎動物細胞的培養(yǎng)。

申請?zhí)枮镃N201510808386.3的中國發(fā)明專利申請公開了一種培養(yǎng)單環(huán)刺螠擔(dān)輪幼蟲細胞系的培養(yǎng)基，以1L計量，該培養(yǎng)基由以下組分組成：13.7g L-15培養(yǎng)基干粉，20.2g/l NaCl、0.54g/l KCl、0.60g/l CaCl₂、1g/l MgSO₄、3.9g/l MgCl₂、2.92g/l L-谷氨酰胺，以及總體積5％的胎牛血清、2％的單環(huán)刺螠體腔液、1％的單環(huán)刺螠卵黃提取液，終濃度100IU/ml的青霉素和100μg/ml的鏈霉素。

該培養(yǎng)基中雖然使用了單環(huán)刺螠體腔液作為營養(yǎng)及細胞調(diào)控因子，使得該培養(yǎng)基比傳統(tǒng)動物細胞培養(yǎng)基更加適用于培養(yǎng)單環(huán)刺螠擔(dān)輪幼蟲細胞系，但該培養(yǎng)基仍存在以下缺陷：(1)培養(yǎng)基中仍舊需要使用胎牛血清，且胎牛血清的使用量比單環(huán)刺螠體腔液還要大得多，表明該培養(yǎng)基雖然不能很好地利用胎牛血清但仍對胎牛血清具有較大依賴性，沒有真正地獲得適用于海洋無脊椎動物的穩(wěn)定有效培養(yǎng)基；同時，胎牛血清價格昂貴，但卻沒有得到充分利用，造成了較大浪費；(2)該培養(yǎng)基只能用于培養(yǎng)單環(huán)刺螠擔(dān)輪幼蟲細胞系，對其他海洋無脊椎動物不適用，適用面窄；(3)其中的單環(huán)刺螠體腔液經(jīng)收集后僅經(jīng)過離心和濾膜過濾處理，而沒有除去其中含有的免疫分子，而免疫分子如果直接加入培養(yǎng)基中極有可能會對培養(yǎng)對象造成損傷。

發(fā)明內(nèi)容

本申請的發(fā)明目的是提供一種作為天然培養(yǎng)基組分、廣泛適用于培養(yǎng)海洋無脊椎動物細胞的海參體腔液。

為實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本申請的技術(shù)方案如下：

一種海參體腔液，由以下方法制備而成：

(1)選取健康的海參，收集體腔原液；

(2)去除所述的體腔原液中的免疫分子、細胞、微生物，獲得所述的海參體腔液。

本申請開發(fā)經(jīng)濟水產(chǎn)動物海參的加工副產(chǎn)物體腔液生物質(zhì)資源，通過一系列加工處理，制備了用于培養(yǎng)海洋無脊椎動物細胞的天然培養(yǎng)基，可替代血清應(yīng)用，并且適用于海洋無脊椎動物細胞的長期培養(yǎng)，不僅為海洋無脊椎動物細胞培養(yǎng)提供支持，具有很高的科學(xué)價值和經(jīng)濟價值；而且還實現(xiàn)了廢物利用，海參體腔液的制備成本遠遠低于牛血清的制備成本，從而也大大降低了海洋無脊椎動物細胞培養(yǎng)基的制備成本。

具體地，所述海參體腔液的制備方法包括以下步驟：

(1)選取健康的海參，收集體腔原液；