[發(fā)明專利]一種植物組織培養(yǎng)中細菌污染物的抑制方法及應用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201810785013.2
• 申請日: 2018-07-17
• 公開（公告）號: CN108782253A
• 公開（公告）日: 2018-11-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 蔡宇良;梁成林;宛甜;劉濤;武仁敦;韓鈺
• 申請（專利權(quán)）人: 西北農(nóng)林科技大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京方圓嘉禾知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11385
• 代理人: 董芙蓉

本發(fā)明公開了一種植物組織培養(yǎng)中細菌污染物的抑制方法及應用，涉及生物技術(shù)領(lǐng)域。該方法包括步驟：采用藥敏紙片擴散技術(shù)篩選出可抑制植物組織培養(yǎng)中細菌污染物的最適抗生素；采用藥敏試驗E?test技術(shù)確定最適抗生素的最低抑制濃度；采用最低抑制濃度的最適抗生素抑制所述植物組織培養(yǎng)中細菌污染物。本發(fā)明首次將藥敏紙片擴散和藥敏試驗E?test技術(shù)應用于植物組織培養(yǎng)，并證實了該方法可快速有效選擇出最適抗生素及最低抑制濃度，在對外植體損傷最小的情況下，通過最小抑制濃度的抗生素添加抑制細菌污染物；本發(fā)明方法不需要檢測和鑒定細菌分離株，具有簡單性、重現(xiàn)性和成本低等優(yōu)點，可廣泛應用以解決困擾植物組織培養(yǎng)的細菌污染問題。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種植物組織培養(yǎng)中細菌污染物的抑制方法及應用。

背景技術(shù)

植物組織培養(yǎng)是在無菌和人工控制的環(huán)境條件下利用適當?shù)呐囵B(yǎng)基對離體的植物器官、組織、細胞及原生質(zhì)體進行培養(yǎng)，使其再生細胞或完整植株的技術(shù)。是基礎(chǔ)研究和應用研究的重要工具，也是商業(yè)應用的重要工具。植物組織培養(yǎng)已經(jīng)是植物生物學的核心技術(shù)，對大規(guī)模繁殖、保護和遺傳資源具有重要意義。

目前，研究和商業(yè)植物組織培養(yǎng)實驗室均受到細菌污染的困擾，植物組織培養(yǎng)的細菌污染物可能來自被感染的體外植株、組織培養(yǎng)操作技術(shù)不當或較差的實驗環(huán)境等，且污染菌株可能是附生或內(nèi)生細菌。附生細菌寄生于植物表面，可以用化學藥劑逐步將其根除。相比之下，內(nèi)生細菌位于植物的細胞間，利用簡單的表面滅菌方法很難消除它們。植物組織培養(yǎng)內(nèi)的內(nèi)生微生物污染物往往會降低其生長、增殖和生根率，在某些情況下甚至會導致植物死亡。

目前，植物內(nèi)的內(nèi)生細菌仍然是植物組織培養(yǎng)中存在的重要問題，通常用抗生素對其進行控制和消除。當細菌的性質(zhì)未知時，廣譜抗生素總是被應用。然而，沒有選擇正確的抗生素往往會導致效果甚微。此外，一般不推薦在培養(yǎng)基中長期使用單一抗生素，因為長期使用抗生素對植物組織有毒害作用，可能會對植株的生長產(chǎn)生負面影響。在以前的研究中，細菌通過傳統(tǒng)的表型鑒定，通常需要幾周的時間；近幾年，許多學者通過擴增16S rDNA及它們的序列片段來對細菌進行鑒定，該方法已在多種植物物種中報道。但是，細菌的種類和數(shù)量眾多，即使通過分子特性鑒定出細菌，仍然不能在短時間內(nèi)選擇最優(yōu)的抗生素進行處理。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明實施例提供了一種植物組織培養(yǎng)中細菌污染物的抑制方法及應用，主要目的是解決處理效率低和準確性低的問題。

為達到上述目的，本發(fā)明主要提供了如下技術(shù)方案：

一方面，本發(fā)明實施例提供了一種植物組織培養(yǎng)中細菌污染物的抑制方法，所述方法包括以下步驟：

采用藥敏紙片擴散技術(shù)篩選出可抑制植物組織培養(yǎng)中細菌污染物的最適抗生素；

采用藥敏試驗E-test技術(shù)確定所述最適抗生素的最低抑制濃度；

采用所述最低抑制濃度的所述最適抗生素抑制所述植物組織培養(yǎng)中細菌污染物。

作為優(yōu)選，所述植物為櫻桃組培苗。

作為優(yōu)選，所述最適抗生素為四環(huán)素、頭孢噻肟、羧芐青霉素、卡那霉素或鏈霉素。

作為優(yōu)選，所述最適抗生素為四環(huán)素。

作為優(yōu)選，所述四環(huán)素的最低抑制濃度為0.5μg mL^-1-1.0μg mL^-1。

作為優(yōu)選，所述四環(huán)素的最低抑制濃度為1.0μg mL^-1。

另一方面，本發(fā)明實施例提供了一種紙片擴散法和抗生素濃度梯度法相結(jié)合的技術(shù)在抑制植物組織培養(yǎng)中細菌污染物中的應用。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：