[發(fā)明專利]一種含環(huán)黃芪醇的髓核細(xì)胞抗衰老抗凋亡培養(yǎng)基

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810782670.1
• 申請(qǐng)日: 2018-07-17
• 公開（公告）號(hào): CN108841783A
• 公開（公告）日: 2018-11-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張小磊;王曉斌;馬吉德.尼薩爾;王向陽
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院;溫州醫(yī)科大學(xué)附屬育英兒童醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12N5/077
• 分類號(hào): C12N5/077
• 代理公司: 蘇州彰尚知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 32336
• 代理人: 潘劍

本發(fā)明涉及椎間盤組織工程及再生領(lǐng)域，特別涉及一種含有環(huán)黃芪醇，特別是不含細(xì)胞因子的培養(yǎng)基用于髓核細(xì)胞培養(yǎng)，發(fā)揮抗衰老和抗凋亡作用的應(yīng)用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及椎間盤組織工程及再生領(lǐng)域，特別涉及一種含有環(huán)黃芪醇，特別是不含細(xì)胞因子的培養(yǎng)基用于髓核細(xì)胞培養(yǎng)，發(fā)揮抗衰老和抗凋亡作用的應(yīng)用。

背景技術(shù)

椎間盤主要由髓核、纖維環(huán)和軟骨終板組成。髓核是椎間盤中含水量最高的組織，髓核細(xì)胞分泌的細(xì)胞外基質(zhì)可形成膠凍樣結(jié)構(gòu)，使得髓核組織可以承受椎體的各種壓力。在某些病理情況下，椎間盤可發(fā)生退變，進(jìn)而導(dǎo)致下腰痛。目前針對(duì)椎間盤退變尚無有效治療手段，采用組織工程手段構(gòu)建人工椎間盤、以及異體移植椎間盤細(xì)胞是新興的椎間盤退變行之有效的治療方式。

構(gòu)建組織工程椎間盤或異體椎間盤細(xì)胞移植都需要用到種子細(xì)胞，特別是髓核細(xì)胞。傳統(tǒng)的髓核細(xì)胞培養(yǎng)條件都是采用高糖培養(yǎng)基，因?yàn)楦咛桥囵B(yǎng)環(huán)境有助于細(xì)胞快速擴(kuò)增；但是高糖培養(yǎng)基同時(shí)可引發(fā)髓核細(xì)胞衰老和凋亡，而衰老、凋亡的髓核細(xì)胞在進(jìn)一步應(yīng)用過程中會(huì)嚴(yán)重影響修復(fù)效果。因此，需要開發(fā)行之有效的方法防止髓核細(xì)胞培養(yǎng)過程中的衰老和凋亡；但是目前尚無抗髓核細(xì)胞凋亡、衰老的培養(yǎng)基。

中國專利CN106754683A公開了一種人臍帶/脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的無分化擴(kuò)增抗衰老培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基應(yīng)用于人臍帶/脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞，而髓核細(xì)胞具有與干細(xì)胞完全不同的生物學(xué)特性和功能，因此該培養(yǎng)基不能應(yīng)用于髓核細(xì)胞體外抗衰老、凋亡培養(yǎng)；另外，該培養(yǎng)基成分含有TGF-beta等11種細(xì)胞因子，以及硫辛酸等9中化學(xué)小分子，成分復(fù)雜、價(jià)格昂貴。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提出一種含環(huán)黃芪醇(Cycloastragenol，CAG)，特別是不含細(xì)胞因子的髓核細(xì)胞抗衰老抗凋亡的培養(yǎng)基，解決了現(xiàn)有技術(shù)中用于培養(yǎng)髓核細(xì)胞的高糖培養(yǎng)基易引起髓核細(xì)胞衰老、凋亡的問題。

本發(fā)明提供一種培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基包括高糖型基礎(chǔ)培養(yǎng)基和環(huán)黃芪醇。

優(yōu)選的，所述高糖型基礎(chǔ)培養(yǎng)基為液體；

優(yōu)選的，所述高糖型基礎(chǔ)培養(yǎng)基選自DMEM培養(yǎng)基、F12培養(yǎng)基、DMEM/F12培養(yǎng)基或RPMI 1640培養(yǎng)基；

優(yōu)選的，所述環(huán)黃芪醇在培養(yǎng)基中的濃度為0.01-10μM；

更優(yōu)選的，所述環(huán)黃芪醇在培養(yǎng)基中的濃度為1-10μM；

優(yōu)選的，所述培養(yǎng)基不含細(xì)胞因子。

進(jìn)一步地，本發(fā)明還提供一種增加髓核細(xì)胞的TERT表達(dá)和端粒長度的方法，所述方法包括將髓核細(xì)胞用環(huán)黃芪醇溶液處理；

優(yōu)選的，所述髓核細(xì)胞因高糖環(huán)境導(dǎo)致TERT表達(dá)減少和端粒長度縮短；

優(yōu)選的，所述環(huán)黃芪醇溶液的濃度為0.01-10μM；

更優(yōu)選的，所述環(huán)黃芪醇溶液的濃度為1-10μM；

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明有益效果主要體現(xiàn)在：本發(fā)明提供了一種含環(huán)黃芪醇，特別是不含細(xì)胞因子的髓核細(xì)胞培養(yǎng)基，解決了現(xiàn)有技術(shù)中用于培養(yǎng)髓核細(xì)胞的高糖培養(yǎng)基易引起髓核細(xì)胞衰老、凋亡的問題，防止了培養(yǎng)過程中髓核細(xì)胞的衰老與凋亡，并有效改善髓核細(xì)胞的生長狀態(tài)。

附圖說明

圖1為高濃度葡萄糖影響髓核細(xì)胞(NP細(xì)胞)存活率圖，其中：

圖1a為用不同濃度的葡萄糖處理髓核細(xì)胞24小時(shí)后的細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒(CCK-8)檢測(cè)結(jié)果。

圖1b為用不同濃度的葡萄糖處理髓核細(xì)胞48小時(shí)后的細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒-8(CCK-8)檢測(cè)結(jié)果。

圖1c為用不同濃度的葡萄糖處理髓核細(xì)胞72小時(shí)后的細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒-8(CCK-8)檢測(cè)結(jié)果。