[發(fā)明專利]一種微生物生化需氧量的測(cè)定傳感器制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810781750.5
• 申請(qǐng)日: 2018-07-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109115848B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-11-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蔡玉榮;趙陳煜;姚菊明;陳瑤;蔡澤瑋
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江理工大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N27/30
• 分類號(hào): G01N27/30;G01N27/333;G01N27/26
• 代理公司: 嘉興永航專利代理事務(wù)所(普通合伙) 33265
• 代理人: 蔡鼎

1.一種微生物生化需氧量的測(cè)定傳感器制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）將玻碳電極在麂皮上順次用1μm、0.3μm、0.05μm的氧化鋁拋光粉打磨，然后依次用超純水、無(wú)水乙醇分別超聲洗滌5min，使玻碳電極表面形成光滑的鏡面，而后浸泡在無(wú)水乙醇中，得到預(yù)處理的玻碳電極；

2）以去離子水為分散介質(zhì)，配制濃度為0.5～2.5mg/ml的科琴黑分散液，用移液槍取5μl上述科琴黑分散液滴涂于步驟1）中所得的玻碳電極上，室溫下干燥，得到科琴黑修飾的玻碳電極；

3）將釀酒酵母凍干粉分散于4wt%葡萄糖溶液中，在恒溫?fù)u床中復(fù)水活化30min，控制搖床轉(zhuǎn)速為180rpm，溫度為37℃；將活化好的釀酒酵母用0.01M的PBS緩沖液洗滌兩次，其中PBS緩沖液pH=7；并用0.01M的PBS緩沖液調(diào)節(jié)釀酒酵母分散液的濃度為2mg/ml，得到適用的酵母分散液；

4）取適量步驟3）中所得的酵母分散液，用移液槍緩慢加入適量20mM的甲萘醌/乙醇溶液，并確保最終混合液中甲萘醌的濃度為0.2mM，最后攪拌30min，得到適用的酵母/甲萘醌混合液；

5）將細(xì)菌纖維素分散液稀釋至0.02～0.24wt%，并通過(guò)機(jī)械攪拌使分散液保持均勻；將步驟4）中的酵母/甲萘醌混合液用移液槍緩慢滴加于細(xì)菌纖維素分散液中，邊滴加邊機(jī)械攪拌，并控制細(xì)菌纖維素分散液與酵母/甲萘醌混合液的體積比為1:1，攪拌10min，得到細(xì)菌纖維素/酵母/甲萘醌混合液；

6）用移液槍取20μl步驟5）中的細(xì)菌纖維素/酵母/甲萘醌混合液滴涂于步驟2）中所得的玻碳電極上，于4℃下低溫干燥12h，最終制得以細(xì)菌纖維素固定化酵母作為敏感元件的微生物生化需氧量測(cè)定傳感器。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微生物生化需氧量的測(cè)定傳感器制備方法，其特征在于，所述PBS緩沖液為0.01M的NaH₂PO₄—Na₂HPO₄，pH=7；甲萘醌/乙醇溶液中，溶劑為99.5%的無(wú)水乙醇，甲萘醌的濃度為20mM。