[發(fā)明專(zhuān)利]一種檢測(cè)肝細(xì)胞癌的試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810772932.6
• 申請(qǐng)日: 2018-07-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108949980B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-03-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 廖興華;戴周彤;項(xiàng)園;張慧敏;黃鳳;張子健;李含含;姚奧;范麗娟;李佳蓬;杜慶;李慧;張同存
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 武漢科技大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/6886
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 武漢藍(lán)寶石專(zhuān)利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 42242
• 代理人: 廉海濤

本發(fā)明公開(kāi)了一種檢測(cè)肝細(xì)胞癌的試劑盒，屬于醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明檢測(cè)肝細(xì)胞癌的試劑盒包含用于檢測(cè)基因組中5個(gè)甲基化特異性位點(diǎn)的序列如SEQ ID NO.1?10所示5對(duì)引物。提取待檢測(cè)者血液的基因組DNA，使用重亞硫酸鹽處理后這5對(duì)引物分別進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物連接到克隆載體中克隆并測(cè)序，根據(jù)測(cè)序結(jié)果分析甲基化位點(diǎn)的個(gè)數(shù)；再提取待檢測(cè)者血液的ctDNA檢測(cè)其長(zhǎng)度。若甲基化位點(diǎn)的個(gè)數(shù)為3個(gè)以上，則可判斷待檢測(cè)者患HCC；若甲基化位點(diǎn)的個(gè)數(shù)為1個(gè)或2個(gè)，且ctDNA長(zhǎng)度小于245bp，則可判斷待檢測(cè)者患HCC。本發(fā)明用血量少、操作簡(jiǎn)便、成本低，準(zhǔn)確率高，可用于HCC的早期診斷，適用于普查應(yīng)用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測(cè)肝細(xì)胞癌的試劑盒。

背景技術(shù)

隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展，癌癥的檢測(cè)技術(shù)已經(jīng)越來(lái)越成熟，但是，對(duì)于癌癥早期的檢測(cè)方法的報(bào)道卻寥寥無(wú)幾。目前，肝細(xì)胞癌(Hepatocellularcarcinoma，HCC)是一種成人最常見(jiàn)的原發(fā)性肝癌，也是造成全球癌癥死亡的主要原因之一，但是HCC比較隱匿，目前HCC的檢測(cè)方法主要依靠影像學(xué)和非特異性腫瘤標(biāo)志物甲胎蛋白(AFP)的血液檢測(cè)，而AFP通常只有在疾病發(fā)生到中晚期的時(shí)候才會(huì)升高。而且血液檢測(cè)法(AFP法)靈敏度很低，使其臨床應(yīng)用很受限。患者確診的時(shí)候往往已經(jīng)到了中晚期，這個(gè)時(shí)候進(jìn)行治療效果不會(huì)很理想。因此一直以來(lái)，人們都希望能在早期發(fā)現(xiàn)HCC。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)現(xiàn)有HCC的早期檢測(cè)技術(shù)不足，提供一種檢測(cè)肝細(xì)胞癌的試劑盒。

本發(fā)明的目的通過(guò)下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一種檢測(cè)肝細(xì)胞癌的試劑盒，包含下述5對(duì)引物：

BMPR1A正向引物：5'-ATGGCATTCCTTCACTCG-3'，

BMPR1A反向引物：5'-CTCCTCCCTTCTCCTTCG-3'；

PSD正向引物：5'-AGCGATTCAAAGATGTGCG-3'，

PSD反向引物：5'-CCTAAGCAGGCTGAGGAAGA-3'；

PLAC8正向引物：5'-CTGTCCTCACTCATTCCCTG-3'，

PLAC8反向引物：5'-CTGCCAAACTTTCTCACCTT-3'；

ATAD2正向引物：5'-CGGCGACCCAACATAAAC-3'，

ATAD2反向引物：5'-GCTGCGGAGAACCACCAT-3'；

KLF3正向引物：5'-CTCACGAATACAAGATGGCTAC-3'，

KLF3反向引物：5'-AGCAATGTCAGGGCTCCA-3'。

這5對(duì)引物用于檢測(cè)基因組中5個(gè)甲基化特異性位點(diǎn)。

進(jìn)一步的，所述的試劑盒還包含提取基因組DNA的試劑、重亞硫酸鹽、PCR試劑和提取ctDNA的試劑中一種、兩種或多種的組合。本發(fā)明試劑盒基于的方法如下：提取待檢測(cè)者血液的基因組DNA，使用重亞硫酸鹽處理后再純化，以純化后的DNA為模板，使用上述5對(duì)引物分別進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物電泳后回收純化，連接到克隆載體中克隆并測(cè)序，根據(jù)測(cè)序結(jié)果分析甲基化位點(diǎn)的個(gè)數(shù)。再提取待檢測(cè)者血液的ctDNA，通過(guò)電泳檢測(cè)ctDNA的長(zhǎng)度。若甲基化位點(diǎn)的個(gè)數(shù)為3個(gè)以上，則可判斷待檢測(cè)者患HCC；若甲基化位點(diǎn)的個(gè)數(shù)為1個(gè)或2個(gè)，且ctDNA長(zhǎng)度小于245bp，則可判斷待檢測(cè)者患HCC。所述的試劑盒還可以包含完成上述方法的任意試劑。

本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)和有益效果：本發(fā)明相對(duì)于傳統(tǒng)的甲胎蛋白檢測(cè)法用血量少、操作簡(jiǎn)便、成本較低，且準(zhǔn)確率高，可用于HCC的早期診斷，適用于普查應(yīng)用。