[發明專利]可分泌抗Ad3FK單克隆抗體的雜交瘤細胞、單克隆抗體及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201810772538.2
• 申請日: 2018-07-13
• 公開（公告）號: CN109097337B
• 公開（公告）日: 2021-10-22
• 發明（設計）人: 田新貴;周榮;張玲
• 申請（專利權）人: 廣州醫科大學附屬第一醫院
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/08;C12N15/13;G01N33/577;C12N15/06;A61K39/395;A61P31/20
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 鄭彤

本發明涉及一種可分泌抗Ad3FK單克隆抗體的雜交瘤細胞、單克隆抗體及其制備方法和應用。一種可分泌抗Ad3FK單克隆抗體的雜交瘤細胞，保藏號為CCTCC No：C201875。上述雜交瘤細胞分泌得到的抗Ad3FK的單克隆抗體，具有高特異性、性能穩定等優點，能夠特異性地結合人3型腺病毒，可廣泛應用在制備治療感染人3型腺病毒的相關疾病的藥物中，也可用于制備檢測人3型腺病毒的檢測試劑或檢測設備中。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別是涉及一種可分泌抗Ad3FK單克隆抗體的雜交瘤細胞、單克隆抗體及其制備方法和應用。

背景技術

至今已發現的人腺病毒(human Adenovirus，HAdV)有7組50多種血清型，超過69種基因型。腺病毒是致病毒性肺炎的主要病原體之一，B組、C組、E組腺病毒都可以引起呼吸道感染，其中人B組腺病毒的3型、7型、14型、55型和E組4型腺病毒是致急性呼吸道感染(ARI)和嬰幼兒致死性肺炎的重要病原體，傳染性強，常導致爆發流行。

國內人腺病毒的流行毒株主要為3型腺病毒，尤其在嬰幼兒腺病毒感染中，人3型腺病毒是致急性呼吸道感染及重癥肺炎的最主要的病原體，并且傳染性強，常導致爆發流行。另外，人3型腺病毒也常常導致眼角膜結膜炎和咽結膜熱。

因此，人3型腺病毒的致病危害性使得其防治顯得十分重要。但目前針對人3型腺病毒人還沒有特異有效的治療藥物。

發明內容

基于此，有必要提供一種可分泌抗Ad3FK單克隆抗體的雜交瘤細胞、單克隆抗體及其制備方法和應用。

一種可分泌抗Ad3FK單克隆抗體的雜交瘤細胞，保藏號為CCTCC No：C201875。

在其中一個實施例中，上述雜交瘤細胞分泌的抗Ad3FK單克隆抗標記為1B5。

一種抗Ad3FK單克隆抗體，所述抗Ad3FK單克隆抗體的輕鏈包括如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，所述抗Ad3FK單克隆抗體的重鏈包括如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。

在其中一個實施例中，編碼所述抗Ad3FK單克隆抗體的輕鏈的基因包括如SEQ IDNO.3所示的堿基序列，編碼所述抗Ad3FK單克隆抗體的重鏈的基因包括如SEQ ID NO.4所示的堿基序列。

一種治療感染人3型腺病毒相關疾病的藥物，其特征在于，上述雜交瘤細胞或如上述抗Ad3FK單克隆抗體。

一種檢測試劑，包括上述雜交瘤細胞或如上述抗Ad3FK單克隆抗體。

一種可分泌抗Ad3FK單克隆抗體的雜交瘤細胞的制備方法，包括如下步驟：

將Ad3FK抗原與弗氏完全佐劑按體積比1:1混合，得到乳化劑；

將所述乳化劑以40μg/只～80μg/只的抗原劑量免疫BALB/c小鼠，飼養2周～3周后，得到初次免疫的小鼠；

將所述Ad11FK抗原與弗氏不完全佐劑按體積比1:1混合后以40μg/只～80μg/只的抗原劑量對所述初次免疫的小鼠進行加強免疫，飼養2周～3周后，得到加強免疫的小鼠；

用所述Ad3FK抗原以20μg/只～50μg/只的抗原劑量對將所述加強免疫的小鼠進行脾內沖擊免疫，飼養2天～4天后，得到沖擊免疫的小鼠；

采集所述沖擊免疫的小鼠的脾細胞；及

將所述脾細胞與小鼠骨髓瘤細胞融合，得到融合細胞；及

用所述Ad3FK抗原篩選所述融合細胞，得到陽性融合細胞，并將所述陽性融合細胞克隆，得到穩定分泌1B5的雜交瘤細胞。

在其中一個實施例中，所述將所述脾細胞與小鼠骨髓瘤細胞融合，得到融合細胞的步驟，包括：