[發明專利]一種促進TRAIL誘導的細胞凋亡的siRNA序列、載體及其用途

在審

• 申請號: 201810772168.2
• 申請日: 2018-07-13
• 公開（公告）號: CN109112127A
• 公開（公告）日: 2019-01-01
• 發明（設計）人: 李良成;黃飛榕;錢麗霞
• 申請（專利權）人: 廈門大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/864;A61K31/713;A61P35/00
• 代理公司: 廈門市精誠新創知識產權代理有限公司 35218
• 代理人: 秦華

本發明公開了一種促進TRAIL誘導的細胞凋亡的siRNA序列、載體及其用途。所述序列如SEQ ID NO:1和2所示，和或SEQ ID NO:3和4所示。其具有有效的下調c?FLIP_L或MADD表達，增強TRAIL誘導的對卵巢癌細胞的殺傷效應的功能。

技術領域

本發明涉及基因工程領域，尤其涉及促進TRAIL誘導的細胞凋亡的siRNA序列、載體及其用途。

背景技術

卵巢癌是常見的女性惡性腫瘤之一，由于發病隱匿，缺乏普查和有效的早期診斷方法，70％以上的患者就診時已屬晚期；另外由于對化療藥物的抵抗，卵巢癌預后極差，死亡率極高，因而急需尋找治療卵巢癌藥物開發的新靶點，進行更有效的治療藥物的篩選和開發。

腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體TRAIL(tumor necrosis factor-relatedapoptosis inducing ligand)是很強的細胞凋亡誘導劑,可選擇性地誘導腫瘤細胞凋亡，而對正常細胞無殺傷作用。目前在美國已完成2期臨床研究，是一個很有希望的抗腫瘤藥物。但是卵巢癌細胞，尤其是上皮細胞型卵巢癌細胞(Epithelial ovarian cancer cells，約占卵巢癌患者的90％)對TRAIL誘導的細胞凋亡產生抵抗作用，限制了其廣泛應用(Song,Chang et al.2014)。卵巢癌細胞對TRAIL誘導的細胞凋亡抵抗機理復雜，其中MADD和c-FLIP_L的高表達，是卵巢癌細胞對TRAIL誘導的細胞凋亡產生抵抗的主要原因。研究發現卵巢癌細胞中高表達MADD或c-FLIP_L可分別阻止FADD與DRs的結合以及pre-caspase-8與FADD的結合，從而抑制TRAIL誘導的卵巢癌細胞凋亡；而序列特異的siRNA分別下調MADD和c-FLIP_L表達可明顯促進TRAIL誘導的細胞凋亡(Clarke and Tyler 2007,El-Gazzar,Wittinger et al.2010,Li,Jayaram et al.2011)。由于MADD和c-FLIP_L分別位于TRAIL誘導的細胞凋亡途徑的不同環節，因而同時抑制MADD和c-FLIP_L的表達有望激活TRAIL誘導的細胞凋亡途徑，有可能達到治療卵巢癌的目的。

siRNA作為治療腫瘤的藥物有很多優點：如用量少，特異性強，可以聯合使用等。但也存在一些局限性，如血液穩定性差，清除快，半衰期短，不易進入細胞等。因而必須借助特定的載體，才能特異、有效地導入病灶部位，達到靶向治療的目的。臨床試驗中常用病毒載體或非病毒載體介導siRNA，將其高效的導入體內。目前使用的最安全的病毒載體主要是腺相關病毒(AAV)(Tomar,Matta et al.2003)。臨床前研究表明，AAV-shRNA可有效的治愈異種移植的小鼠前列腺癌(Sun,Tang et al.2010)。利用病毒為載體進行疾病治療，最大的擔憂在于其安全性，但是根據美國FDA報道的近70項以AAV為載體的I期或II期臨床研究結果顯示，尚未發現因其安全性而終止實驗的例子(Bowles,McPhee et al.2012)。表明以腺相關病毒為載體進行藥物開發是安全的。

發明內容

本發明的目的在于提供一種促進TRAIL誘導的細胞凋亡的siRNA序列及其靶向遞送方法。其具有有效的下調c-FLIP_L或MADD表達，增強TRAIL誘導的對卵巢癌細胞的殺傷效應的功能。

為實現上述目的，本發明提供一種促進TRAIL誘導的細胞凋亡的siRNA序列，其特征在于，所述序列如SEQ ID NO:1和2所示，和或SEQ ID NO:3和4所示。

本發明還提供一種重組載體，其特征在于，含有上述所述的序列。

進一步，所述重組載體為含有上述所述的序列的AAV重組載體。

進一步所述siRNA序列與所述重組載體具有有效的下調c-FLIPL或MADD表達的效果。