[發(fā)明專(zhuān)利]鈣調(diào)蛋白特異性結(jié)合靶肽修飾的還原型氧化石墨烯納米粒子的制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810768665.5
• 申請(qǐng)日: 2018-07-13
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109053874B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-08-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 邢成芬;柴燃;展永;高冬;邱亮;袁宏博
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 河北工業(yè)大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C07K14/47
• 分類(lèi)號(hào): C07K14/47;A61K47/52;A61K41/00;A61K38/17;A61P35/00;A61P9/06;C01B32/198;C01B32/184
• 代理公司: 天津翰林知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 12210
• 代理人: 趙鳳英

1.一種鈣調(diào)蛋白特異性結(jié)合靶肽修飾的還原型氧化石墨烯納米粒子的制備方法，其特征為該方法包括以下步驟：

a）將氧化石墨烯分散液超聲破碎30-120分鐘，之后離心除去微米級(jí)別的氧化石墨烯；所述的氧化石墨烯分散液濃度為0.5-5mg/mL；

b）將上步得到的溶液用微孔濾膜過(guò)濾，得到納米氧化石墨烯；

c）在50-80℃下，將氧化石墨烯、鈣調(diào)蛋白結(jié)合靶肽、氫氧化鉀加入到水中攪拌10-20小時(shí)；其中，質(zhì)量比為氧化石墨烯：鈣調(diào)蛋白結(jié)合肽：氫氧化鉀：水=20-50：2-5：100-500：2000-10000；

d）反應(yīng)完成后，冷卻至室溫，經(jīng)超濾管洗脫，得到鈣調(diào)蛋白特異性結(jié)合靶肽修飾的還原型氧化石墨烯納米粒子；

所述的的鈣調(diào)蛋白結(jié)合靶肽是氨基酸序列為NH2-QASERGHITRKKLKGEKK-COOH的靶肽。

2.如權(quán)利要求1所述的鈣調(diào)蛋白特異性結(jié)合靶肽修飾的還原型氧化石墨烯納米粒子的制備方法，其特征為所述步驟a）中，超聲破碎的超聲功率50-200W，離心速度為2000-5000轉(zhuǎn)/分。

3.如權(quán)利要求1所述的鈣調(diào)蛋白特異性結(jié)合靶肽修飾的還原型氧化石墨烯納米粒子的制備方法，其特征為所述b）中微孔濾膜材質(zhì)為尼龍、混合纖維素酯、聚偏氟乙烯、聚醚砜、聚丙烯聚或四氟乙烯，微孔的尺度為0.22或0.45微米。

4.如權(quán)利要求1所述的方法制備的鈣調(diào)蛋白特異性結(jié)合靶肽修飾的還原型氧化石墨烯納米粒子的應(yīng)用，其特征為用于體外調(diào)控離子通道或體外調(diào)控鈣調(diào)蛋白的構(gòu)象變化。

5.如權(quán)利要求4所述的方法制備的鈣調(diào)蛋白特異性結(jié)合靶肽修飾的還原型氧化石墨烯納米粒子的應(yīng)用，其特征為所述的體外用于調(diào)控離子通道，包括以下步驟：

a)將細(xì)胞接種在鋪有細(xì)胞爬片的24孔板中，待細(xì)胞生長(zhǎng)24小時(shí)后，每孔加入50μL孵育完成的液體，然后繼續(xù)培養(yǎng)18～36小時(shí)；加入鈣調(diào)蛋白特異性結(jié)合靶肽修飾的還原型氧化石墨烯納米粒子，放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)孵育2-6小時(shí)；

其中，細(xì)胞接種密度為0.5×10⁵-5×10⁶，所述的孵育完成的液體的孵育步驟包括：將2微克離子通道質(zhì)粒與6μL X-tremeGENE HP DNA 轉(zhuǎn)染試劑在200μL Opti-MEM培養(yǎng)基里混合，靜置20分；

b) 取出爬片，用緩沖液清洗，用近紅外光照射爬片上的細(xì)胞3-8分鐘，完成離子通道的調(diào)控；

所述a）中 鈣調(diào)蛋白特異性結(jié)合靶肽修飾的還原型氧化石墨烯納米粒子加入后在24孔板中溶液的濃度為5-50μg/mL。

6.如權(quán)利要求5所述的方法制備的鈣調(diào)蛋白特異性結(jié)合靶肽修飾的還原型氧化石墨烯納米粒子的應(yīng)用，其特征為所述b）中，所述緩沖液為HEPES緩沖液、臺(tái)氏液、Tris緩沖液、PB緩沖液或PBS緩沖液。

7.如權(quán)利要求5所述的鈣調(diào)蛋白特異性結(jié)合靶肽修飾的還原型氧化石墨烯納米粒子的應(yīng)用，其特征為所述近紅外光的波長(zhǎng)為750～1500nm，光照強(qiáng)度為0.5-4 W/cm²。

8.如權(quán)利要求5所述的鈣調(diào)蛋白特異性結(jié)合靶肽修飾的還原型氧化石墨烯納米粒子的應(yīng)用，其特征為所述的細(xì)胞為HEK 293細(xì)胞。

9.如權(quán)利要求5所述的方法制備的鈣調(diào)蛋白特異性結(jié)合靶肽修飾的還原型氧化石墨烯納米粒子的應(yīng)用，其特征為所述a）中培養(yǎng)箱中為5%二氧化碳，37℃。