[發(fā)明專利]一種鴨瘟病毒的培養(yǎng)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810768008.0
• 申請(qǐng)日: 2018-07-13
• 公開（公告）號(hào): CN109234239B
• 公開（公告）日: 2021-09-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 胡美容;林德銳;齊冬梅;鄭鐵鎖;李嘉愛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣東永順生物制藥股份有限公司
• 主分類號(hào): C12N7/00
• 分類號(hào): C12N7/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種鴨瘟病毒的培養(yǎng)方法，其特征在于，采用雞胚成纖維細(xì)胞系DF-1培養(yǎng)鴨瘟病毒，包括以下步驟：

(1)超劑量鴨瘟病毒液接種DF-1細(xì)胞，所述超劑量為10^6.5-10^7.5TCID₅₀/ml的病毒液按照與DF-1細(xì)胞液體積比的3％-12％接種量；

其中，步驟(1)中所述鴨瘟病毒液為CEF細(xì)胞培養(yǎng)的鴨瘟病毒液；其中，步驟(1)所述DF-1細(xì)胞液中添加體積比3％-8％的9-11日齡的SPF雞胚尿囊液，以增加初始鴨瘟病毒的適應(yīng)性；

(2)接毒后5-10日收獲含病毒的細(xì)胞液，反復(fù)凍融后按照步驟(1)再次接種DF-1細(xì)胞，如此盲傳多代，至接種鴨瘟病毒后120小時(shí)內(nèi)CPE達(dá)75％以上時(shí)收獲病毒液；

(3)收獲的病毒液凍融后按照與DF-1細(xì)胞液0.5％-10％的體積比接種于DF-1細(xì)胞，培養(yǎng)；

其中，步驟(3)所述DF-1細(xì)胞液中不添加雞胚尿囊液。

2.如權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，采用10^7.5TCID₅₀/ml的病毒液按照與DF-1細(xì)胞液體積比的5％接種量。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，設(shè)立空白對(duì)照組，處理方式為以CEF細(xì)胞液為接種源來接種DF-1細(xì)胞，若空白對(duì)照組整個(gè)培養(yǎng)過程均為陰性，即每次盲傳接種后5-10日均無CPE，則培養(yǎng)方法可信。

4.根據(jù)權(quán)利要求2-3任一所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟(1)所述DF-1細(xì)胞液中添加體積比4％-6％的9-11日齡的SPF雞胚尿囊液。

5.雞胚成纖維細(xì)胞系DF-1在培養(yǎng)鴨瘟病毒中的應(yīng)用，其特征在于，培養(yǎng)過程包括以下步驟：

(1)超劑量鴨瘟病毒液接種DF-1細(xì)胞，所述超劑量為10^6.5-10^7.5TCID₅₀/ml的病毒液按照與DF-1細(xì)胞液體積比的3％-12％接種量；

其中，步驟(1)中所述鴨瘟病毒液為CEF細(xì)胞培養(yǎng)的鴨瘟病毒液；

其中，步驟(1)所述DF-1細(xì)胞液中添加體積比3％-8％的9-11日齡的SPF雞胚尿囊液，以增加初始鴨瘟病毒的適應(yīng)性；

(2)接毒后5-10日收獲含病毒的細(xì)胞液，反復(fù)凍融后按照步驟(1)再次接種DF-1細(xì)胞，如此盲傳多代，至接種鴨瘟病毒后120小時(shí)內(nèi)CPE達(dá)75％以上時(shí)收獲病毒液；

(3)收獲的病毒液凍融后按照與DF-1細(xì)胞液0.5％-10％的體積比接種于DF-1細(xì)胞，培養(yǎng)；

其中，步驟(3)所述DF-1細(xì)胞液中不添加雞胚尿囊液。

6.權(quán)利要求1-4任一所述培養(yǎng)方法在制備鴨瘟病毒疫苗中的應(yīng)用。