[發明專利]人彈性蛋白酶抑制劑在皮膚創傷愈合中的應用

在審

• 申請號: 201810765348.8
• 申請日: 2018-07-12
• 公開（公告）號: CN108524543A
• 公開（公告）日: 2018-09-14
• 發明（設計）人: 吳訓偉;邢志青;王紅麗;付曉萌;王杰;李霄
• 申請（專利權）人: 濟南磐升生物技術有限公司
• 主分類號: A61K35/36
• 分類號: A61K35/36;A61P17/02
• 代理公司: 濟南誠智商標專利事務所有限公司 37105
• 代理人: 朱彩霞

本發明提供人彈性蛋白酶抑制劑在皮膚創傷愈合中的應用。本發明首次研究了人彈性蛋白酶抑制劑與創口愈合的關系，明確了人彈性蛋白酶抑制劑在創口愈合過程中發揮的作用。人彈性蛋白酶抑制劑可以促進真皮細胞及表皮細胞增殖和遷移。研究證明人彈性蛋白酶抑制劑用于創口愈合具有傷口結痂迅速、炎癥反應率低等優點。將人彈性蛋白酶抑制劑制成外用藥物，為創口愈合提供了新的選擇。

技術領域

本發明屬于生物醫學領域，具體涉及人彈性蛋白酶抑制劑在皮膚創傷愈合中的應用。

背景技術

皮膚是人體最大的器官，對人體具有極其重要的作用，它可使機體內各個組織、器官免受物理性、機械性、化學性和病原微生物等的損傷，但極易受到外力或燒、燙等破壞，從而引發創傷。隨著工業化程度的不斷發展和經濟生活水平的進步，各種創傷(如燒、燙傷)顯著增加，近年來糖尿病引發的難愈性創傷也在相應增加，皮膚創傷修復與再生面臨巨大挑戰。在多數情況下皮膚受到損傷后自身不能愈合，留下大面積疤痕不但影響自身的美觀，而且大面積損傷極易引發感染，嚴重的將導致病人死亡。因此，需要尋找可有效減輕患者病痛、改善疤痕外觀的皮膚創傷愈合治療的新方法。

人彈性蛋白酶是一種蛋白分解酶，可分解人的結締組織和微血管成分，從而使細胞表面和基底膜的完整性遭到破環，導致皮膚創傷愈合難度增大；同時，人彈性蛋白酶還會促進IL-8(白細胞介素-8)的產生，從而加重炎癥反應，進一步降低創傷愈合效果。人彈性蛋白酶是造成全身炎癥反應綜合征的重要損害因子。

人彈性蛋白酶抑制劑可與人彈性蛋白酶分子活性中心上的一些基團結合，從而使彈性蛋白酶活力下降，甚至消失，但不會導致彈性蛋白酶的變性，該因子參與細胞的增殖、遷移、組織重塑、細胞間相互作用及其多種病理生理過程。人彈性蛋白酶抑制劑是人彈性蛋白酶的選擇性抑制劑，是一種嗜中性彈性蛋白酶陽離子抑制劑，具有抗細菌、抗炎癥因子、誘導細胞增殖分化等生物學功能，可改善結締組織與微血管的分解、縮短炎癥反應的時間、降低燒燙傷創口感染的發生率。人彈性蛋白酶抑制劑一方面能降低炎癥反應，防止病原體的入侵，具有廣泛的組織保護作用，另一方面具有修復受損組織的功能。因此，深入研究人彈性蛋白酶抑制劑的功能，開發相關產品具有重要的現實意義。

發明內容

本發明旨在對人彈性蛋白酶抑制劑在人皮膚創傷愈合中發揮的作用進行研究，提供人彈性蛋白酶抑制劑在皮膚創傷愈合中的應用，該人彈性蛋白酶抑制劑可做成外用藥物用于臨床，具有抗炎抗感染、促進傷口愈合的作用，也可做成噴劑、滴劑、藥膏、凝膠、敷料等產品，具有極大應用潛力。

本發明一方面，提供了人彈性蛋白酶抑制劑在皮膚創傷愈合中的應用，具體是，所述人彈性蛋白酶抑制劑在誘導細胞增殖分化、促進皮膚創傷愈合、減少創口炎癥反應中的應用。

本發明另一方面，還提供了人彈性蛋白酶抑制劑的制備方法：先用DDF-K培養液培養人表皮細胞，然后回收、分離細胞培養上清液，濃縮上清液中即含有人彈性蛋白酶抑制劑。

具體步驟是：將人表皮細胞加入含10％FBS的DMEM培養基中，混勻，離心，棄上清，細胞沉淀用含雙抗的DMEM培養基重懸洗滌一次，離心，棄上清，加入DDF-K培養基重懸細胞沉淀，轉接入T75細胞培養瓶中，將培養瓶放置于培養箱中培養；培養條件：溫度為36～38℃，CO₂水平為4.5～5.5％，濕度為90～100％，4天換液一次；待細胞密度達90％以上時，收集細胞；回收、分離細胞培養上清液，濃縮上清液中人彈性蛋白酶抑制劑含量大于25％。經過進一步分離、提純即可得到純度較高的人彈性蛋白酶抑制劑產品。

為進一步研究人彈性蛋白酶抑制劑的功能，將人彈性蛋白酶抑制劑加入體外培養的人真皮成纖維細胞培養液中。與普通培養液相比，加入人彈性蛋白酶抑制劑的真皮細胞狀態更好，生長迅速。且人彈性蛋白酶抑制劑同樣可以促進真皮成纖維細胞增殖。真皮成纖維細胞劃痕處理后，加入人彈性蛋白酶抑制劑比不加的細胞遷移速度快、劃痕處細胞狀態好、劃痕恢復所需時間短。