[發(fā)明專利]人彈性蛋白酶抑制劑在皮膚創(chuàng)傷愈合中的應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810765348.8
• 申請(qǐng)日: 2018-07-12
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108524543A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-09-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳訓(xùn)偉;邢志青;王紅麗;付曉萌;王杰;李霄
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 濟(jì)南磐升生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): A61K35/36
• 分類號(hào): A61K35/36;A61P17/02
• 代理公司: 濟(jì)南誠(chéng)智商標(biāo)專利事務(wù)所有限公司 37105
• 代理人: 朱彩霞

本發(fā)明提供人彈性蛋白酶抑制劑在皮膚創(chuàng)傷愈合中的應(yīng)用。本發(fā)明首次研究了人彈性蛋白酶抑制劑與創(chuàng)口愈合的關(guān)系，明確了人彈性蛋白酶抑制劑在創(chuàng)口愈合過(guò)程中發(fā)揮的作用。人彈性蛋白酶抑制劑可以促進(jìn)真皮細(xì)胞及表皮細(xì)胞增殖和遷移。研究證明人彈性蛋白酶抑制劑用于創(chuàng)口愈合具有傷口結(jié)痂迅速、炎癥反應(yīng)率低等優(yōu)點(diǎn)。將人彈性蛋白酶抑制劑制成外用藥物，為創(chuàng)口愈合提供了新的選擇。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，具體涉及人彈性蛋白酶抑制劑在皮膚創(chuàng)傷愈合中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

皮膚是人體最大的器官，對(duì)人體具有極其重要的作用，它可使機(jī)體內(nèi)各個(gè)組織、器官免受物理性、機(jī)械性、化學(xué)性和病原微生物等的損傷，但極易受到外力或燒、燙等破壞，從而引發(fā)創(chuàng)傷。隨著工業(yè)化程度的不斷發(fā)展和經(jīng)濟(jì)生活水平的進(jìn)步，各種創(chuàng)傷(如燒、燙傷)顯著增加，近年來(lái)糖尿病引發(fā)的難愈性創(chuàng)傷也在相應(yīng)增加，皮膚創(chuàng)傷修復(fù)與再生面臨巨大挑戰(zhàn)。在多數(shù)情況下皮膚受到損傷后自身不能愈合，留下大面積疤痕不但影響自身的美觀，而且大面積損傷極易引發(fā)感染，嚴(yán)重的將導(dǎo)致病人死亡。因此，需要尋找可有效減輕患者病痛、改善疤痕外觀的皮膚創(chuàng)傷愈合治療的新方法。

人彈性蛋白酶是一種蛋白分解酶，可分解人的結(jié)締組織和微血管成分，從而使細(xì)胞表面和基底膜的完整性遭到破環(huán)，導(dǎo)致皮膚創(chuàng)傷愈合難度增大；同時(shí)，人彈性蛋白酶還會(huì)促進(jìn)IL-8(白細(xì)胞介素-8)的產(chǎn)生，從而加重炎癥反應(yīng)，進(jìn)一步降低創(chuàng)傷愈合效果。人彈性蛋白酶是造成全身炎癥反應(yīng)綜合征的重要損害因子。

人彈性蛋白酶抑制劑可與人彈性蛋白酶分子活性中心上的一些基團(tuán)結(jié)合，從而使彈性蛋白酶活力下降，甚至消失，但不會(huì)導(dǎo)致彈性蛋白酶的變性，該因子參與細(xì)胞的增殖、遷移、組織重塑、細(xì)胞間相互作用及其多種病理生理過(guò)程。人彈性蛋白酶抑制劑是人彈性蛋白酶的選擇性抑制劑，是一種嗜中性彈性蛋白酶陽(yáng)離子抑制劑，具有抗細(xì)菌、抗炎癥因子、誘導(dǎo)細(xì)胞增殖分化等生物學(xué)功能，可改善結(jié)締組織與微血管的分解、縮短炎癥反應(yīng)的時(shí)間、降低燒燙傷創(chuàng)口感染的發(fā)生率。人彈性蛋白酶抑制劑一方面能降低炎癥反應(yīng)，防止病原體的入侵，具有廣泛的組織保護(hù)作用，另一方面具有修復(fù)受損組織的功能。因此，深入研究人彈性蛋白酶抑制劑的功能，開(kāi)發(fā)相關(guān)產(chǎn)品具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在對(duì)人彈性蛋白酶抑制劑在人皮膚創(chuàng)傷愈合中發(fā)揮的作用進(jìn)行研究，提供人彈性蛋白酶抑制劑在皮膚創(chuàng)傷愈合中的應(yīng)用，該人彈性蛋白酶抑制劑可做成外用藥物用于臨床，具有抗炎抗感染、促進(jìn)傷口愈合的作用，也可做成噴劑、滴劑、藥膏、凝膠、敷料等產(chǎn)品，具有極大應(yīng)用潛力。

本發(fā)明一方面，提供了人彈性蛋白酶抑制劑在皮膚創(chuàng)傷愈合中的應(yīng)用，具體是，所述人彈性蛋白酶抑制劑在誘導(dǎo)細(xì)胞增殖分化、促進(jìn)皮膚創(chuàng)傷愈合、減少創(chuàng)口炎癥反應(yīng)中的應(yīng)用。

本發(fā)明另一方面，還提供了人彈性蛋白酶抑制劑的制備方法：先用DDF-K培養(yǎng)液培養(yǎng)人表皮細(xì)胞，然后回收、分離細(xì)胞培養(yǎng)上清液，濃縮上清液中即含有人彈性蛋白酶抑制劑。

具體步驟是：將人表皮細(xì)胞加入含10％FBS的DMEM培養(yǎng)基中，混勻，離心，棄上清，細(xì)胞沉淀用含雙抗的DMEM培養(yǎng)基重懸洗滌一次，離心，棄上清，加入DDF-K培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀，轉(zhuǎn)接入T75細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，將培養(yǎng)瓶放置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；培養(yǎng)條件：溫度為36～38℃，CO₂水平為4.5～5.5％，濕度為90～100％，4天換液一次；待細(xì)胞密度達(dá)90％以上時(shí)，收集細(xì)胞；回收、分離細(xì)胞培養(yǎng)上清液，濃縮上清液中人彈性蛋白酶抑制劑含量大于25％。經(jīng)過(guò)進(jìn)一步分離、提純即可得到純度較高的人彈性蛋白酶抑制劑產(chǎn)品。

為進(jìn)一步研究人彈性蛋白酶抑制劑的功能，將人彈性蛋白酶抑制劑加入體外培養(yǎng)的人真皮成纖維細(xì)胞培養(yǎng)液中。與普通培養(yǎng)液相比，加入人彈性蛋白酶抑制劑的真皮細(xì)胞狀態(tài)更好，生長(zhǎng)迅速。且人彈性蛋白酶抑制劑同樣可以促進(jìn)真皮成纖維細(xì)胞增殖。真皮成纖維細(xì)胞劃痕處理后，加入人彈性蛋白酶抑制劑比不加的細(xì)胞遷移速度快、劃痕處細(xì)胞狀態(tài)好、劃痕恢復(fù)所需時(shí)間短。