[發明專利]PD-1特異性干擾序列、質粒、減毒沙門氏菌及在抗腫瘤的應用

有效

• 申請號: 201810758334.3
• 申請日: 2018-07-11
• 公開（公告）號: CN108913690B
• 公開（公告）日: 2020-01-14
• 發明（設計）人: 馮志偉;趙鐵鎖;賈慧婕;鐘加滕;郭勝;徐德啟;魏甜
• 申請（專利權）人: 新鄉醫學院
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/74;C12N1/21;A61K31/7088;A61K47/46;A61P35/00;C12R1/42
• 代理公司: 61223 西安銘澤知識產權代理事務所(普通合伙)
• 代理人: 俞曉明

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種PD?1特異性干擾序列、質粒、減毒沙門氏菌及在抗腫瘤的應用。所述PD?1特異性干擾序列為序列1、序列2或者序列3；其中序列1的正義鏈如SEQ ID NO.1所示，反義鏈如SEQ ID NO.2所示，序列2的正義鏈如SEQ ID NO.3所示，反義鏈如SEQ ID NO.4所示，序列3的正義鏈如SEQ ID NO.5所示，反義鏈如SEQ ID NO.6所示。所述PD?1特異性干擾質粒是將PD?1特異性干擾序列連接入pGCSilencer neo2.0?U6質粒后制得的。利用構建的減毒沙門氏菌運載PD?1特異性干擾質粒來治療腫瘤，將為臨床上腫瘤的治療提供新的策略及制劑，并產生極大市場經濟效益。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種PD-1特異性干擾序列、質粒、減毒沙門氏菌及在抗腫瘤的應用。

背景技術

據《中國腫瘤登記年報》報告顯示，每年新發病例為312萬人，死亡近200萬，過去30年中國癌癥死亡率增加80％，成為中國城市居民的第一位死因和農村居民的第二位死因。美國2014年的統計顯示，世界范圍內男性發病位居前兩位的分別是前列腺癌和肺癌，女性發病位居前兩位的分別是乳腺癌和肺癌。而隨著現代環境的變化，特別是霧霾的增加，肺癌的發病率呈現明顯的上升趨勢。癌癥不僅成為危害中國居民健康最重要的疾病之一，其帶來的經濟負擔和對社會發展的不良影響日益突顯。我國現每年用于癌癥治療的醫療費用多達數千億元，且呈現逐年上升趨勢。然而，即使花費了大量的財力，中晚期的腫瘤病人依然很難治愈。

PD-1/PD-L在腫瘤免疫檢查點治療腫瘤方面取得了重大的進展，1992年，陳列平提出了腫瘤微環境中存在“免疫逃逸關鍵分子”的假設。PD-1(programmed death 1)程序性死亡受體1，是一種重要的免疫抑制分子。PD-1主要在激活的T細胞和B細胞中表達，腫瘤細胞會高表達PD-1的配體：PD-L1和PD-L2，受體和配體結合時導致對免疫細胞激活的抑制。腫瘤微環境會誘導浸潤的T細胞高表達PD-1分子，導致腫瘤微環境中PD-1通路持續激活，T細胞功能被抑制，無法殺傷腫瘤細胞。抗人PD-1單克隆抗體可以阻斷這一通路，恢復T細胞的功能，使這些細胞能夠繼續殺傷腫瘤細胞。1999年至2002年間，他發明了用抗體封閉PD-1/PD-L1結合來增強免疫反應，并在動物實驗證明了該抗體能夠成功的治療腫瘤。這些發現為目前抗腫瘤免疫逃逸提供了新的治療方法，從而奠定了單克隆抗體治療腫瘤的理論基礎。基于這個原理設計的用于阻斷PD-1和PD-L1結合的抗體治療(簡稱抗PD-1治療)已經在成千上萬的癌癥病人身上使用，并證實在十余種晚期癌癥，包括肺癌、腎癌、黑色素瘤、頭頸癌、膀胱癌、乳腺癌、肝癌、胃癌、食管癌、腦膠質瘤、結腸癌、何杰金氏淋巴瘤等有顯著療效，PD-1治療是目前最有效的免疫治療方法。

目前，抑制PD-1通路已經成為了腫瘤免疫治療中一個非常重要的免疫檢查點。應用單克隆抗體抑制PD-1通路能夠有效的治療包括黑色素瘤在內的多種腫瘤，但眾所周知，信號通路的抑制除了應用單克隆抗體外，也可以直接干擾其基因的表達。RNAi已成為遺傳學領域和基因治療學領域中的重要核心課題。其方法是通過長度為21-25nt的雙鏈小干擾RNA以堿基互補配對方式，特異地降解靶目標RNA(mRNA)，從而消除該靶標RNA的功能，阻斷其調控作用或阻斷其對應蛋白的合成。RNA干擾現象的發現，極大激發了核酸生物制藥技術的研究熱度。但是，目前尚未發現可以抑制PD-1通路的小干擾RNA序列。

發明內容

本發明提供的一種PD-1特異性干擾序列、質粒、減毒沙門氏菌及在抗腫瘤的應用，開發了一種可以抑制PD-1通路的小干擾RNA序列。

本發明提供了一種PD-1特異性干擾序列，所述PD-1特異性干擾序列為序列1、序列2或者序列3；其中序列1的正義鏈如SEQ ID NO.1所示，反義鏈如SEQ ID NO.2所示，序列2的正義鏈如SEQ ID NO.3所示，反義鏈如SEQ ID NO.4所示，序列3的正義鏈如SEQ ID NO.5所示，反義鏈如SEQ ID NO.6所示。