[發明專利]抗真菌的融合蛋白及其相關生物材料與應用

有效

• 申請號: 201810757488.0
• 申請日: 2018-07-11
• 公開（公告）號: CN108864303B
• 公開（公告）日: 2022-03-01
• 發明（設計）人: 趙國剛;顧金剛;谷天燕;李玲聰;呂晨茵;劉曉楠
• 申請（專利權）人: 河北農業大學;中國農業科學院農業資源與農業區劃研究所
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N9/24;C12N9/42;C12N15/62;C12N15/70;A01N37/46;A01P3/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

本發明公開了抗真菌的融合蛋白及其相關生物材料與應用。該融合蛋白質為將殼聚糖酶和幾丁質酶融合在一起得到的抗真菌活性高于所述殼聚糖酶和所述幾丁質酶的蛋白質。本發明將來源于鏈霉菌(Streptomyces alfalfae)的幾丁質酶SaChiB和來源于鏈霉菌(Streptomyces alfalfae)的殼聚糖酶SaCsn融合在一起得到了抗真菌活性高于單獨的幾丁質酶和單獨的殼聚糖酶的重組蛋白質。本發明將幾丁質酶和殼聚糖酶融合在一起得到的融合蛋白質，在長枝木霉和短密木霉方面均起到了協同作用。本發明的融合蛋白質可用于制備生防制劑。

技術領域

本發明涉及生物領域中抗真菌的融合蛋白及其相關生物材料與應用。

背景技術

植物病原真菌是造成植物病害的主要因素，約占植物病害的70％～80％，從而導致大規模的農作物死亡以致農作物產量下降。目前對真菌的防治主要是化學方法，這存在嚴重的環境污染，開發更高效、更安全的抗真菌制劑迫在眉睫。

幾丁質酶是一種能夠催化幾丁質產生N-乙酰氨基葡萄糖單體或低分子量幾丁寡糖的水解酶。據報道，幾丁質酶可作為潛在的生防制劑，可以有效的抑制多種病原真菌，尤其是GH19家族的幾丁質酶，經研究僅在鏈霉菌中發現，鏈霉菌屬(或放線菌屬)通過獲得19家族幾丁質酶基因在與真菌的相互作用中獲得了一些優勢，例如來源于S.griseus的GH19家族的chitinase C能夠有效抑制T.reesei,而來源于Serratia marcescens的chitinaseA和來源于B.circulans的chitinase A1均沒有作用。殼聚糖酶是一種對殼聚糖的β-1,4-糖苷鍵進行斷裂以釋放殼寡糖的水解酶，經研究，其主要對以殼聚糖為主要成分的真菌有作用，如：接合菌，其他方面的抗真菌作用尚沒有深入研究。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是如何提高殼聚糖酶和/或幾丁質酶的抗病原真菌活性。

為了解決上述技術問題，本發明提供了融合蛋白質。

本發明所提供的融合蛋白質將殼聚糖酶和幾丁質酶融合在一起得到的抗真菌活性高于所述殼聚糖酶和所述幾丁質酶的蛋白質。

上述融合蛋白質中，所述真菌可為長枝木霉、短密木霉、灰葡病菌、立枯絲核菌、核盤菌和禾谷鐮孢菌這6種真菌的全部、任5種、任4種、任3種、任2種或任1種。

上述融合蛋白質中，所述殼聚糖酶和所述幾丁質酶均可來源于鏈霉菌，如苜蓿鏈霉菌(Streptomyces alfalfae)。

上述融合蛋白質中，所述殼聚糖酶可為A1)-A3)中的任一蛋白質：

A1)氨基酸序列是SEQ ID No.2的第323-570位氨基酸殘基的蛋白質；

A2)將A1)所示的蛋白質經過一個以上氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加得到與A1)具有90％以上的同一性且具有殼聚糖酶活性的蛋白質；

A3)在A1)或A2)所示的蛋白質的羧基端或/和氨基端融合蛋白標簽得到的融合蛋白；

所述幾丁質酶可為D1)-D3)中的任一蛋白質：

D1)氨基酸序列是SEQ ID No.2的第53-322位氨基酸殘基的蛋白質；

D2)將D1)所示的蛋白質經過一個以上氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加得到與B1)具有90％以上的同一性且具有幾丁質酶活性的蛋白質；

D3)在D1)或D2)所示的蛋白質的羧基端或/和氨基端融合蛋白標簽得到的融合蛋白。

上述融合蛋白質中，所述融合蛋白質可為F1)-F4)中的任一蛋白質：

F1)氨基酸序列是SEQ ID No.2的蛋白質；