[發(fā)明專利]靶向BCMA和CD19嵌合抗原受體及其用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810755381.2
• 申請日: 2018-09-19
• 公開（公告）號: CN110923255B
• 公開（公告）日: 2023-08-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉雅容;金濤
• 申請（專利權(quán)）人: 上海恒潤達生生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C12N15/867;C12N7/01;C12N5/10;C07K19/00;A61K35/17;A61P35/00
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本發(fā)明涉及雙靶向BCMA和CD19的嵌合抗原受體及其用途。具體而言，本發(fā)明提供一種多核苷酸序列，選自：(1)含有依次連接的抗BCMA和抗CD19單鏈抗體的編碼序列、人IgG4鉸鏈區(qū)的編碼序列、人CD28跨膜區(qū)的編碼序列、人41BB胞內(nèi)區(qū)的編碼序列、人CD3ζ胞內(nèi)區(qū)的編碼序列和任選的EGFR的含胞外結(jié)構(gòu)域III和胞外結(jié)構(gòu)域IV的片段的編碼序列的多核苷酸序列；和(2)(1)所述多核苷酸序列的互補序列。本發(fā)明還提供相關(guān)的融合蛋白、含所述編碼序列的載體，以及所述融合蛋白、編碼序列、載體的用途。本發(fā)明制備的BCMA?CD19?BBz?CAR?T細胞對特異性腫瘤細胞具強烈的殺傷功能，CD107a表達和IFNγ分泌較高，效靶比是5:1的情況下對靶細胞殺傷效率都達到80％左右。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于細胞治療領(lǐng)域，具體涉及雙靶向BCMA和CD19的嵌合抗原受體及其用途。

背景技術(shù)

嵌合抗原受體(Chimeric?Antigen?Receptor-T?cell，CAR-T)T細胞是指經(jīng)基因修飾后，能以MHC非限制性方式識別特定目的抗原，并且持續(xù)活化擴增的T細胞。2012年國際細胞治療協(xié)會年會中指出生物免疫細胞治療已經(jīng)成為手術(shù)、放療、化療外的第四種治療腫瘤的手段，并將成為未來腫瘤治療必選手段。CAR-T細胞回輸治療是當(dāng)前腫瘤治療中最明確有效的免疫治療形式。大量研究表明，CAR-T細胞可以有效的識別腫瘤抗原，引起特異性的抗腫瘤免疫應(yīng)答，顯著改善患者的生存狀況。

嵌合抗原受體(CAR)是CAR-T的核心部件，賦予T細胞HLA非依賴的方式識別腫瘤抗原的能力，這使得經(jīng)過CAR改造的T細胞相較于天然T細胞表面受體TCR能夠識別更廣泛的目標。CAR的基礎(chǔ)設(shè)計中包括一個腫瘤相關(guān)抗原(tumor-associated?antigen，TAA)結(jié)合區(qū)(通常來源于單克隆抗體抗原結(jié)合區(qū)域的scFV段)，一個胞外鉸鏈區(qū)，一個跨膜區(qū)和一個胞內(nèi)信號區(qū)。目標抗原的選擇對于CAR的特異性、有效性以及基因改造T細胞自身的安全性來講都是關(guān)鍵的決定因素。

CD19是一種B細胞表面的95kDa的糖蛋白，從B細胞發(fā)育的早期即開始表達，直至其分化為漿細胞。CD19是免疫球蛋白(Ig)超家族的成員之一，作為B細胞表面信號轉(zhuǎn)導(dǎo)復(fù)合物的組成元素之一，參與調(diào)控了B細胞受體的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程。在CD19缺陷的小鼠模型中，外周淋巴組織中B細胞的數(shù)量會出現(xiàn)明顯的減少，對疫苗和絲裂原的應(yīng)答也會下降，同時伴有血清Ig水平的減低。通常認為，CD19的表達只限于B細胞系(B-cell?lineage)，而不表達于多能造血干細胞表面。CD19還表達于大多數(shù)B細胞淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、ALLs、CLLs、多毛細胞白血病，和一部分急性髓性白血病細胞的表面。因此，在對白血病/淋巴瘤的治療中，CD19是一種非常有價值的免疫治療靶點。重要的是，CD19不會表達于除B細胞外的大多數(shù)正常細胞表面，包括多能造血干細胞，這一特征使CD19可以作為一種安全的治療靶點，可將患者發(fā)生自身免疫性疾病或不可逆性骨髓毒性損傷的風(fēng)險降至最低。當(dāng)前，已經(jīng)研制出了抗CD19的抗體或scFv片段，并且在小鼠模型和人類/靈長類動物中證明了其應(yīng)用的前景。

近年來，CD19CAR?T細胞領(lǐng)域競爭激烈，一些大的制藥公司也和研究機構(gòu)建立了合作關(guān)系。接受表達CD28或4-1BB的CD19CAR?T細胞治療后，小兒和成人復(fù)發(fā)或難治性急性B細胞淋巴瘤具有大約90％的完全緩解率。最近，CD19CAR?T細胞治療在彌漫性大B細胞淋巴瘤，濾泡淋巴瘤或慢性淋巴瘤中具有50％-100％的總體緩解率。CD19CAR?T細胞治療多發(fā)性骨髓瘤病人中具有臨床優(yōu)勢，由于終末分化的漿細胞不表達CD19，惡性B細胞前體持續(xù)產(chǎn)生惡性漿細胞。