[發明專利]一種鑒別鐵皮石斛和霍山石斛的ISSR引物及其方法在審
| 申請號： | 201810751513.4 | 申請日： | 2018-07-10 |
| 公開（公告）號： | CN108588269A | 公開（公告）日： | 2018-09-28 |
| 發明（設計）人： | 段媛媛;游景茂;盧超;郭杰;郭曉亮;周武先 | 申請（專利權）人： | 湖北省農業科學院中藥材研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/6895 | 分類號： | C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246 | 代理人： | 夏艷 |
| 地址： | 445000 湖北省*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 霍山石斛 鐵皮石斛 引物 鑒別 核苷酸序列 遺傳關系 擴增 節約 應用 優化 分析 | ||
【權利要求書】：
1.一種鑒別鐵皮石斛和霍山石斛的ISSR引物，其特征在于，所述的ISSR引物包括UBC817、UBC826、UBC827、UBC834、UBC842或UBC849，其核苷酸序列分別如SEQ ID NO.1～6所示。
2.一種鑒別鐵皮石斛和霍山石斛的ISSR-PCR反應體系，其特征在于，包括以下步驟：
1)采集鐵皮石斛和霍山石斛的嫩葉，用于提取植物組DNA；
2)采用1％瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA的完整性；
3)采用ISSR-PCR反應體系對步驟(1)所提取的DNA樣品進行擴增。
3.根據權利要求2所述的反應體系，其特征在于，所述的ISSR-PCR反應所用的引物為UBC817、UBC826、UBC827、UBC834、UBC842或UBC849。
4.根據權利要求2所述的反應體系，其特征在于，所述的ISSR-PCR的擴增體系為：20μL的反應體系中含有2×Taq Master Mix 11.5μL，模板DNA 35ng，引物0.4μM。
5.根據權利要求2所述的反應體系，其特征在于，所述的ISSR-PCR的擴增程序為：94℃預變性5min，94℃變性30s，52.2～56.2℃退火30s，72℃延伸1.5min，循環35次，72℃再延伸10min，4℃保存。
6.權利要求1所述的引物在鑒別鐵皮石斛和霍山石斛中的應用。
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