[發明專利]一種特異性結合轉移性胃癌細胞的核酸適配體及其應用

有效

• 申請號: 201810748271.3
• 申請日: 2018-07-10
• 公開（公告）號: CN108929873B
• 公開（公告）日: 2021-10-29
• 發明（設計）人: 羅昭鋒;方曉娜;劉濤;王亞雷
• 申請（專利權）人: 安徽省昂普拓邁生物科技有限責任公司
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115;G01N33/574;C12N5/09
• 代理公司: 合肥市長遠專利代理事務所(普通合伙) 34119
• 代理人: 傅磊

本發明公開了一種特異性結合轉移性胃癌細胞的核酸適配體，所述核酸適配體序列包含以下四種序列中的至少一種：A、如SEQ ID No.1所示的DNA序列；B、與SEQ ID No.1所示DNA序列具有60％以上同源性，且能夠特異性結合轉移性胃癌細胞的DNA序列；C、在嚴格條件下與SEQ ID No.1所示DNA序列雜交的DNA序列；D、由SEQ ID No.1所示DNA序列轉錄的RNA序列。本發明還公開了一種核酸適配體衍生物。本發明還公開了上述核酸適配體或核酸適配體衍生物的應用。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種特異性結合轉移性胃癌細胞的核酸適配體及其應用。

背景技術

轉移和侵襲是惡性腫瘤最重要的標志，是癌癥病人死亡的主要因素。在胃癌病例中約有50％的新確診患者是轉移性病變，通常會導致不良預后。腫瘤細胞膜分子與許多惡性腫瘤的浸潤轉移密切相關。腫瘤細胞膜分子靶點的鑒定需要有效的分子探針，這些探針需要具有很好的親和力和特異性。

核酸適配體(aptamer)是指通過指數富集的配基系統進化技術(SELEX)篩選分離得到的DNA或者RNA分子，也稱為化學抗體，它可以與其他靶標如蛋白質、金屬離子、小分子、多肽甚至整個細胞進行高親和力和特異性的結合。與傳統的抗體相比，核酸適配體具有分子量小，穩定性更好，易改造修飾，無免疫原性，制作周期短，可以通過人工合成等優勢，免去了動物免疫、飼養、蛋白提取和純化等一系列流程。因此核酸適配體是一種非常理想的分子探針，可以特異結合到目標細胞或者蛋白表面。

正如我們所知，預后不佳的轉移性癌癥無法治愈，是導致大多數癌癥病人死亡的原因?；赟ELEX的方法，核酸適配體在癌細胞靶向治療研究中有很大突破，包括肝癌、結腸癌、結直腸癌、前列腺癌等，但是目前，還沒有能夠區分轉移性胃癌細胞和非轉移性胃癌細胞的核酸適配體。因此，能區分轉移性胃癌細胞和非轉移性胃癌細胞的核酸適配體具有非常重要的價值。

發明內容

基于背景技術存在的技術問題，本發明提出了一種特異性結合轉移性胃癌細胞的核酸適配體及其應用，本發明能特異性結合轉移性胃癌細胞。

本發明提出的一種特異性結合轉移性胃癌細胞的核酸適配體，所述核酸適配體序列包含以下四種序列中的至少一種：

A、如SEQ ID No.1所示的DNA序列；

B、與SEQ ID No.1所示DNA序列具有60％以上同源性，且能夠特異性結合轉移性胃癌細胞的DNA序列；

C、在嚴格條件下與SEQ ID No.1所示DNA序列雜交的DNA序列；

D、由SEQ ID No.1所示DNA序列轉錄的RNA序列。

優選地，上述與SEQ ID No.1所示DNA序列具有同源性，且能夠特異性結合轉移性胃癌細胞的DNA序列，其同源性可以為60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％。

發明人通過指數富集細胞系統進化(Cell-SELEX)方法，對轉移性胃癌細胞進行核酸適配體篩選，篩選過程中使用淋巴結轉移的胃癌細胞系HGC-27細胞作為靶標細胞，使用高分化胃腺癌AGS細胞作為反篩細胞，篩選得到特異性識別轉移性胃癌細胞的核酸適配體，簡稱其為核酸適配體LW-25，其序列如SEQ ID No.1所示。

優選地，所述核酸適配體序列被修飾，所述修飾包括磷酸化、甲基化、氨基化、巰基化、用硫取代氧、用硒取代氧或同位素化。

優選地，所述核酸適配體序列上連接熒光標記物、放射性物質、治療性物質、生物素、地高辛、納米發光材料、小肽、siRNA或酶。

本發明還提出了一種核酸適配體衍生物，所述核酸適配體衍生物是由上述核酸適配體序列的骨架衍生出的硫代磷酸酯骨架序列，或者是由上述核酸適配體改造成的肽核酸。