[發明專利]一種用于肝癌早期篩查的試劑盒及其使用方法

有效

• 申請號: 201810746544.0
• 申請日: 2018-07-09
• 公開（公告）號: CN108753979B
• 公開（公告）日: 2021-10-26
• 發明（設計）人: 邵琦
• 申請（專利權）人: 安徽達健醫學科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 王志坤

本發明屬于分子生物學領域，具體涉及一種用于肝癌早期篩查的試劑盒及其使用方法。本發明首次發現SCAND3可作為用于檢測肝癌的甲基化標志物。檢測SCAND3甲基化的引物序列如下：正向引物序列如SEQ ID NO.1所示，反向引物序列如SEQ ID NO.2所示；所述熒光探針序列為SEQ ID NO.3，探針5′端標記FAM，3′端標記MGB。本發明以SCAND3為用于肝癌早期篩查的甲基化標志物，用于肝癌診斷，具有靈敏度高和特異性強的優點，尤其是在AFP＜400μg/L患者中，SCAND3甲基化發生率高達60％；由此可知，本發明以SCAND3為甲基化標志物，適用于肝癌的診斷，尤其適用于早期肝癌的診斷。

技術領域

本發明屬于分子生物學領域，具體涉及一種用于肝癌早期篩查的試劑盒及其使用方法。

背景技術

肝細胞肝癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)是威脅人類生命常見的惡性腫瘤之一，而多數原發性肝癌患者早期癥狀不明顯，確診時大多數患者已經達到中晚期，因此實現早期診斷、獲得根治性切除是患者長期生存的唯一希望。由于缺乏特異性的腫瘤標志物，多數患者確診時已屬晚期，喪失了根治性切除的機會。

目前，肝癌診斷方法包括影像學檢查、病理學檢查及實驗室檢查。但早期肝癌影像學表現不典型，且部分檢查具有輻射性及價格昂貴的缺點。肝穿刺活組織檢查是診斷HCC的金標準，但早期肝癌病灶小，穿刺活檢難度大，且具有一定程度的創傷性，不易被患者接受。腫瘤標志物檢測對肝癌影像學及病理學診斷具有重要的補充價值，并且通過監測肝癌標志物，能比其他方法提前發現腫瘤或腫瘤的復發、轉移，提高預測和診斷的準確性，從而提高療效，改善預后。在原發性肝癌診斷中，臨床應用最廣泛的腫瘤標志物是甲胎蛋白(AFP)，但其診斷敏感性和特異性不太令人滿意，診斷肝癌的靈敏度和特異度分別為41％～65％和80％～94％。

近年來的研究發現，腫瘤患者外周血漿中存在游離的腫瘤DNA，并且具有與腫瘤細胞DNA相同的基因改變，因此檢測腫瘤患者外周循環DNA為腫瘤的早期微創診斷提供了新的手段。

AFP仍是臨床應用最為普遍的診斷肝癌的腫瘤標志物，其以400μg/L為臨床診斷肝癌臨界值；AFP≥400μg/L時，診斷率較高；而對于部分早期、可切除患者，即AFP＜400μg/L易被漏診。因而，尋求靈敏度和特異度更高的腫瘤標志物對肝癌的早期診斷具有重要意義，尤其對AFP＜400μg/L患者。

發明內容

本發明主要目的是，提供一種用于肝癌早期篩查的試劑盒及其使用方法。本發明首次發現SCAND3的甲基化程度與肝癌發生相關，并且可通過檢測外周血中SCAND3甲基化程度，用于肝癌的早期檢測和診斷。

為了實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

本發明目的之一，提供一種用于肝癌早期篩查的甲基化標志物，所述甲基化標志物為SCAND3。

本發明目的之二，提供以上所述的甲基化標志物在制備肝癌早期篩查診斷試劑中的應用。

本發明目的之三，提供一組用于檢測以上所述甲基化標志物的引物及探針，所述引物序列如下：正向引物序列如SEQ ID NO.1所示，反向引物序列如SEQ ID NO.2所示；所述熒光探針序列為SEQ ID NO.3，探針5′端標記FAM，3′端標記MGB。

本發明目的之四，提供以上所述的引物及探針在制備用于肝癌早期篩查的試劑盒的應用。

本發明目的之五，提供一種試劑盒，包括以上所述的引物及探針，還包括檢測GAPDH的正向引物及探針，PCR Master Mix，裂解液，蛋白酶K，漂洗液，亞硫酸氫鹽溶液和ddH₂O。

本發明目的之六，提供以上所述試劑盒的使用方法，步驟如下：