[發明專利]一種CelB基因的用途有效
| 申請號： | 201810737276.6 | 申請日： | 2018-07-06 |
| 公開（公告）號： | CN108796104B | 公開（公告）日： | 2021-07-02 |
| 發明（設計）人： | 夏雪山;宋玉竹;楊光英 | 申請（專利權）人： | 云南科耀生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/689 | 分類號： | C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京品源專利代理有限公司 11332 | 代理人： | 鞏克棟 |
| 地址： | 650000 云南省昆明市昆明經*** | 國省代碼： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 celb 基因 用途 | ||
1.一種CelB基因用于非疾病的診斷和治療目的的鑒定肺炎克雷伯氏菌的用途，其特征在于，所述CelB基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.如權利要求1所述的用途，其特征在于，根據所述CelB基因設計特異性引物，所述特異性引物包括一對外游引物和一對內游引物；
其中，所述外游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2-3所示，所述內游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.4-5所示。
3.如權利要求1所述的用途，其特征在于，所述鑒定肺炎克雷伯氏菌包括如下步驟：
(1)針對基因CelB設計特異性引物，包括一對外游引物；
(2)采集樣本并進行增菌培養，提取DNA，得到待測模板；
(3)建立PCR鑒定體系，對待測模板進行檢測；
或者，所述鑒定肺炎克雷伯氏菌包括如下步驟：
(1')針對基因CelB設計特異性引物，包括一對外游引物和一對內游引物；
(2')采集樣本并進行增菌培養，提取DNA，得到待測模板；
(3')建立LAMP鑒定體系，對待測模板進行檢測。
4.如權利要求3所述的用途，其特征在于，在步驟(1)和步驟(1')之前還包括BLAST篩選步驟。
5.如權利要求4所述的用途，其特征在于，所述BLAST篩選包括本地BLAST和在線BLAST。
6.如權利要求3所述的用途，其特征在于，步驟(3)所述PCR鑒定體系的反應體系為：10-15μL 2×PCR預混液，8-12μM的外游引物，40-60ng待測樣品DNA。
7.如權利要求6所述的用途，其特征在于，所述預混液包含1-3U DNA聚合酶、1-3mMMgCl2和180-220μM dNTP。
8.如權利要求3所述的用途，其特征在于，步驟(3)所述PCR鑒定體系的反應條件為：95℃預變性5min；95℃變性30s，57℃退火30s，72℃延伸，35個循環；72℃延伸2min。
9.如權利要求3所述的用途，其特征在于，步驟(3')所述LAMP鑒定體系的反應體系為：13-17μL 2×等溫預混液，6-10μM內游引物，1-3μM外游引物，80-120ng待測樣品DNA。
10.如權利要求3所述的用途，其特征在于，步驟(3')所述LAMP鑒定體系的反應條件為：63-68℃溫育30min，80-98℃進行退火。
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