[發(fā)明專利]病毒和細菌病原體的直接擴增和檢測

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201810736044.9
• 申請日: 2012-07-06
• 公開（公告）號: CN108866169A
• 公開（公告）日: 2018-11-23
• 發(fā)明（設計）人: M.?？怂辜{;L.杰基;Y-P.陳;H.麥;M.M.塔布;M.艾耶
• 申請（專利權）人: 探索診斷投資公司
• 主分類號: C12Q1/686
• 分類號: C12Q1/686;C12Q1/689;C12Q1/70
• 代理公司: 北京坤瑞律師事務所 11494
• 代理人: 張平元

1.DNA聚合酶和緩沖液在制備一種用于鑒定從人獲得的生物學樣品中來自微生物的靶核酸的存在或缺乏的方法的試劑盒中的用途，所述方法包括：

(a)在如下的條件下使所述生物學樣品與含有DNA聚合酶和緩沖液的反應混合物接觸以形成樣品混合物，所述條件適合于在不從所述生物學樣品提取所述靶核酸的情況中從所述樣品擴增所述靶核酸；

(b)將來自步驟(a)的所述樣品混合物熱循環(huán)，從而在存在的情況中使得所述靶核酸得到擴增；并

(c)在存在的情況中檢測從步驟(b)生成的擴增的靶核酸，

其中所述的生物學樣品是選自：全血、血漿、血清、和腦脊髓液(CSF)，

其中在將生物學樣品與反應混合物接觸前，所述的生物學樣品不進行稀釋；

其中步驟(a)之后的樣品混合物總體積的20-30％為生物學樣品；

且其中所述反應混合物含有陽離子型表面活性劑。

2.權利要求1的用途，其中在步驟(b)前加熱所述樣品。

3.權利要求2的用途，其中在步驟(a)前加熱所述樣品。

4.權利要求1的用途，其中在步驟(b)前將所述樣品于至少約70℃的溫度加熱至少約2分鐘。

5.權利要求1的用途，其中所述緩沖液包含氯化鉀(KCl)。

6.權利要求5的用途，其中所述KCl以約5mM至約50mM的濃度存在。

7.權利要求1的用途，其中所述緩沖液包含GoTaq^TMFlexi緩沖液。

8.權利要求7的用途，其中所述GoTaq^TMFlexi緩沖液在步驟(b)期間以1倍-5倍濃度存在。

9.權利要求1的用途，其中所述DNA聚合酶是Taq聚合酶。

10.權利要求1的用途，其中所述靶核酸是DNA。

11.權利要求1的用途，其中所述靶核酸是RNA。

12.權利要求11的用途，其中在擴增前還使所述樣品與逆轉錄酶接觸。

13.權利要求12的用途，其中使所述樣品同時與所述DNA聚合酶和所述逆轉錄酶接觸。

14.權利要求1的用途，其中所述微生物是病毒。

15.權利要求14的用途，其中所述病毒選自下組：流感病毒、呼吸道合胞病毒、水痘帶狀皰疹病毒、單純皰疹病毒和腸道病毒。

16.權利要求1的用途，其中所述微生物是細菌。

17.權利要求16的用途，其中所述細菌是梭菌屬(Clostridium)或鏈球菌屬(Streptococcus)。

18.權利要求1的用途，其中所述緩沖劑還包含清蛋白。

19.權利要求18的用途，其中所述清蛋白是牛血清白蛋白(BSA)。