[發(fā)明專利]用于檢測二價汞離子的生物工程菌及其制備方法和用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810732044.1
• 申請日: 2018-07-05
• 公開（公告）號: CN108949659B
• 公開（公告）日: 2022-01-28
• 發(fā)明（設計）人: 王丹;鄭亞楠;金楠皓;韋娜;龐婷;劉婷;梁樂桂;包曉萍
• 申請（專利權）人: 南寧師范大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/70;G01N21/64;C12R1/19
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理有限公司 11369
• 代理人: 靳浩

1.用于檢測二價汞離子的生物工程菌，其特征在于，所述生物工程菌含有表達載體merR op-ompA-rfp-pSB1A2，其中， merR op-ompA-rfp為重組基因，pSB1A2為質粒骨架，merR的基因序列如SEQ ID NO.1所示，op的基因序列如SEQ ID NO.2所示，ompA的基因序列如SEQ ID NO.3所示，rfp的基因序列如SEQ ID NO.4所示，所述生物工程菌為大腸桿菌。

2.如權利要求1所述的用于檢測二價汞離子的生物工程菌的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟一、利用PCR擴增反應分別實現merR op、ompA、rfp基因片段的擴增，將擴增后的merR op基因片段和ompA基因片段通過重疊延伸PCR技術連接，并通過PCR擴增反應實現擴增，得到目的基因片段merR op-ompA；

步驟二、使用限制性內切酶XbaI和SpeI對pSB1A2質粒骨架和目的基因片段merR op-ompA進行雙酶切，使目的基因片段merR op-ompA和pSB1A2質粒骨架同時露出相同的粘性末端，通過T4 DNA連接酶將目的基因片段merR op-ompA和pSB1A2質粒骨架連接，實現merR op-ompA-pSB1A2質粒的構建；

步驟三、使用限制性內切酶SpeI對merR op-ompA-pSB1A2質粒和擴增后的rfp基因片段進行單酶切，再用T4 DNA連接酶將merR op-ompA-pSB1A2質粒和擴增后的rfp基因片段連接，完成表達載體merR op-ompA- rfp-pSB1A2的構建；

步驟四、通過化學轉化法將表達載體merR op-ompA- rfp-pSB1A2轉化至感受態(tài)細胞內，獲得所述生物工程菌。

3.如權利要求2所述的用于檢測二價汞離子的生物工程菌的制備方法，其特征在于，步驟一中的目的基因片段merR op-ompA具體通過以下方法獲得：分別以全合成的merR op、ompA、rfp基因序列為模板，進行第一次PCR擴增反應，再將擴增后的merR op和ompA基因片段末端的互補片段通過重疊延伸PCR技術實現merR op和ompA的連接，得到連接片段merR op-ompA，進行第二次PCR擴增反應，實現連接片段merR op-ompA的擴增，得到目的基因片段merR op-ompA。

4.如權利要求2所述的用于檢測二價汞離子的生物工程菌的制備方法，其特征在于，步驟四中的感受態(tài)細胞為E.coli DH5α感受態(tài)細胞。