[發(fā)明專利]一種利用IbMPK3基因提高甘薯對逆境抵御性的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810731702.5
• 申請日: 2018-07-05
• 公開（公告）號: CN108893478A
• 公開（公告）日: 2018-11-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 靳容;劉明;李洪民;張愛君;陳曉光;唐忠厚
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇徐淮地區(qū)徐州農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所(江蘇徐州甘薯研究中心)
• 主分類號: C12N15/54
• 分類號: C12N15/54;C12N15/82;A01H5/00;A01H6/00
• 代理公司: 北京盛凡智榮知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11616
• 代理人: 戴翔

1.一種利用IbMPK3基因提高甘薯對逆境抵御性的方法，其特征在于：所述方法通過過表達(dá)IbMPK3基因以提高甘薯植株對逆境的抵御性。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用IbMPK3基因提高甘薯對逆境抵御性的方法，其特征在于：所述IbMPK3基因的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.1所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種利用IbMPK3基因提高甘薯對逆境抵御性的方法，其特征在于：克隆權(quán)利要求2所述基因的引物SEQ ID No.2和SEQ ID No.3。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種利用IbMPK3基因提高甘薯對逆境抵御性的方法，其特征在于：所述過表達(dá)是將上下游引物擴增IbMPK3基因序列。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用IbMPK3基因提高甘薯對逆境抵御性的方法，其特征包含如下步驟：

步驟1：構(gòu)建重組載體CaMV35S-IbMPK3；

步驟2：把重組載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌GV3101菌株中，在YEP培養(yǎng)基中加入卡那霉素，經(jīng)平板篩選，獲得單菌落，提取單菌落基因組進(jìn)行PCR驗證，獲得過表達(dá)IbMPK3基因的農(nóng)桿菌重組菌株；

步驟3：利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法侵染甘薯愈傷，在MS培養(yǎng)基中加入潮霉素進(jìn)行選擇性培養(yǎng)，直至愈傷長成小苗；

步驟4：提取小苗葉片DNA，根據(jù)載體上GFP6基因設(shè)計引物SEQ ID No.4和SEQ ID No.5；載體和IbMPK3序列設(shè)計引物SEQ ID No.4和SEQ ID No.6鑒定轉(zhuǎn)基因植株；并設(shè)計qRT-PCR引物SEQ ID No.7和SEQ ID No.8，篩選轉(zhuǎn)基因株系；

步驟5：驗證該基因IbMPK3在提高甘薯的耐非生物脅迫性。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種利用IbMPK3基因提高甘薯對逆境抵御性的方法，其特征在于，挑取過表達(dá)IbMPK3基因的農(nóng)桿菌單菌落接種在液體YEP培養(yǎng)基，30℃過夜培養(yǎng)；取100μl過夜培養(yǎng)液轉(zhuǎn)接到含有100μM乙酰丁香酮的新鮮的YEP培養(yǎng)基中，30℃培養(yǎng)4-6小時，培養(yǎng)液OD₆₀₀達(dá)到0.8-1.0，離心收集菌體。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種利用IbMPK3基因提高甘薯對逆境抵御性的方法，其特征在于，篩選出的過表達(dá)植株放置在溫室中進(jìn)行擴繁，光照強度為150μmol m^-2s^-1，濕度85％，光照時間16h/8h(光/暗)，溫度20-25℃。

8.一種IbMPK3基因利用權(quán)利要求5所述的步驟在甘薯植株中的應(yīng)用。