[發明專利]一種快速檢測生物標志物的滑動微流控芯片

在審

• 申請號: 201810728732.0
• 申請日: 2018-07-05
• 公開（公告）號: CN108896754A
• 公開（公告）日: 2018-11-27
• 發明（設計）人: 宋玉君;楊健
• 申請（專利權）人: 南京優芯生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/533
• 分類號: G01N33/533;G01N33/558
• 代理公司: 南京縱橫知識產權代理有限公司 32224
• 代理人: 嚴曉彪;董建林

1.滑動微控流芯片，其特征在于，基材為玻片，包括匹配的第一玻片和第二玻片；

所述玻片的貼合面刻有若干槽道，包括通過主流道依次串聯的試劑槽、氣體槽、抗體槽、樣品槽和檢測槽，所述抗體槽的前端和后端分別串接緩沖槽；

所述試劑槽包括主試劑槽和副試劑槽；

所述主試劑槽、氣體槽、抗體槽、樣品槽、檢測槽和緩沖槽刻于第一玻片，

所述副試劑槽、主流道刻于第二玻片；

所述緩沖槽設有若干組間隔流道，由平行的主流道和輔流道組成，刻于第二玻片。

2.根據權利要求1所述的滑動微控流芯片，其特征在于，所述主試劑槽、副試劑槽、緩沖槽、抗體槽、樣品槽分別設有匹配的注入孔和流出孔，分別通過注入流道和流出流道接通；

所述副試劑槽的注入流道、流出流道刻于第一玻片，注入孔、流出孔，刻于第二玻片；

所述主試劑槽、緩沖槽、抗體槽、樣品槽的注入孔、流出孔及注入流道、流出流道，刻于第二玻片；

且，輔流道接通時：主試劑槽、緩沖槽、抗體槽、樣品槽分別與注入孔、流出孔接通。

3.根據權利要求1所述的滑動微控流芯片，其特征在于，所述檢測槽接指示槽道，包括通過次流道依次串聯的第二副試劑槽、指示氣體槽、指示劑槽和匹配刻度標的刻度槽；

所述第二副試劑槽、指示劑槽分別設有匹配的注入孔、流出孔和注入流道、流出流道；

所述次流道、指示氣體槽及指示劑槽的注入流道、流出流道和刻度槽，刻于第一玻片；

指示劑槽及其注入孔、流出孔，第二副試劑槽及其注入孔、流出孔和刻度標刻于第二玻片；

且，主流道接通時：指示劑槽、第二副試劑槽分別與注入孔、流出孔接通。

4.根據權利要求1所述的滑動微控流芯片的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

A1、設計芯片掩模，采用標準光刻和/或濕法刻蝕玻片；

A2、對刻蝕好的玻片進行打孔，用疏水試劑將玻片的表面修飾成疏水性后，組成芯片。

5.基于權利要求1-4任一所述的滑動微控流芯片快速檢測生物標志物的方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、通過與檢測槽內的環氧基團反應，共價固定捕獲抗體；

S2、將生物標志物標準溶液加入樣品槽，

將緩沖液加入緩沖槽，

將復合探針溶液加入抗體槽，

將過氧化氫溶液與鉑納米粒子溶液分別加入主試劑槽和副試劑槽；

S3、滑動玻片接通主流道，試劑槽內產生的的氣體推動液體依次通過檢測槽，完成抗原抗體ELISA反應；

S4、使用全自動熒光顯微鏡獲取檢測槽內檢測期間的熒光圖片后，結合Image J分析得到單位面積內熒光納米粒子的個數；

S5、將不同濃度的生物標志物標準溶液加入樣品槽，重復步驟S2-S4，繪制標準曲線圖；

S6、將生物標志物樣品加入樣品槽，重復步驟S2-S4后，結合步驟S5的標準曲線圖分析得到待測抗體樣品的濃度。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述步驟S1中固定捕獲抗體的步驟為：

B1、用食人魚溶液孵育檢測槽一段時間后，清洗；

B2、用10% 3-(2,3-環氧丙氧)丙基三甲氧基硅烷（GPS）和甲苯的混合液孵育檢測槽一段時間后，清洗、烘干；

B3、將捕獲抗體在檢測槽內孵育一段時間，共價固定后，清洗。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述步驟B1中的食人魚溶液為H₂SO₄:H₂O₂=7:3，孵育時間為1-2h，清洗液為去離子水；

步驟B2中的孵育時間為1-2h，清洗液為甲苯，烘干溫度為100-120℃；

步驟B3中的孵育溫度為3-5℃，清洗液為質量含量為4-6%的 BSA溶液。