[發明專利]一種磷脂酶A2受體蛋白的制備方法在審
| 申請號： | 201810728337.2 | 申請日： | 2018-07-05 |
| 公開（公告）號： | CN108948181A | 公開（公告）日： | 2018-12-07 |
| 發明（設計）人： | 郁勝強;麥靖邦 | 申請（專利權）人： | 睿諾醫療科技（上海）有限公司 |
| 主分類號： | C07K14/705 | 分類號： | C07K14/705;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/18;C07K1/16;C12N15/12;C12N15/85 |
| 代理公司： | 上海市金茂律師事務所 31299 | 代理人： | 王崢;謝瑞強 |
| 地址： | 201206 上海市浦東新區上海浦東*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 轉染細胞 制備 受體蛋白 磷脂酶 胞外片段 連接產物 蛋白 純化處理 單克隆化 定量檢測 活體檢測 基因設計 血清樣本 壓力篩選 質粒載體 傳統的 高純度 侵入性 傷害性 細胞株 抗體 轉染 腎病 轉入 基因 應用 | ||
1.一種磷脂酶A2受體蛋白的制備方法，其特征在于，包括：
根據PLA2R胞外片段基因設計PCR引物，并且進行PCR擴增處理；
將所述PLA2R胞外片段基因轉入質粒載體，以得到連接產物；
利用所述連接產物進行轉染處理，以得到轉染細胞；
對所述轉染細胞進行壓力篩選處理；
對所述轉染細胞進行細胞株單克隆化處理；
利用所述轉染細胞提取PLA2R蛋白，并進行純化處理。
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述根據PLA2R胞外片段基因設計PCR引物的步驟具體包括：
設計所述PCR引物的PLA2R胞外片段基因正向引物和PLA2R胞外片段基因反向引物；
其中，所述PLA2R胞外片段基因正向引物設有第一限制性酶切位點，所述PLA2R胞外片段基因反向引物設有第二限制性酶切位點。
3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，
根據如下基因序列設計所述PLA2R胞外片段基因正向引物：
5’-CGTGGCCGGCCGCCGCCACCATGCTGCTG-3’；
其中，所述第一限制性酶切位點為：GGCCGGCC；
并且，根據如下基因序列設計所述PLA2R胞外片段基因反向引物：
5’-TAAGCTAGCTCATTTGTCGTCATCATCCTTATAGTCCTTATCATCGTCGTCTTTGTAATCCTTGTCATCGTCATCCTTGTAGTCGCTGCCACCGCCACCGCTGTGACTTGGTCCTTTTTCTGGC-3’；
其中，所述第二限制性酶切位點為：GCTAGC。
4.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述PCR擴增處理的步驟具體包括：
利用PCR緩沖液、所述PLA2R胞外片段基因正向引物、所述PLA2R胞外片段基因反向引物和cDNA模板配制PCR反應溶液進行PCR反應，以獲取擴增的PCR產物。
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