[發明專利]干血片中免疫抑制劑的檢測方法以及檢測試劑盒在審
| 申請號： | 201810727288.0 | 申請日： | 2018-07-04 |
| 公開（公告）號： | CN109030673A | 公開（公告）日： | 2018-12-18 |
| 發明（設計）人： | 李士敏;袁京群;吳筱丹;葛志偉;朱亞爾;李家睿 | 申請（專利權）人： | 易達精準（杭州）科技有限公司 |
| 主分類號： | G01N30/06 | 分類號： | G01N30/06;G01N30/88 |
| 代理公司： | 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224 | 代理人： | 胡紅娟 |
| 地址： | 310026 浙江省杭州市經*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 免疫抑制劑 檢測 標準曲線方程 標準樣本 待測樣本 檢測試劑 干血片 內標物 提取液 串聯質譜法 環孢菌素A 標準曲線 雷帕霉素 內標溶液 取上清液 他克莫司 線性回歸 依維莫司 復溶液 后提取 上清液 有效地 吹干 復溶 甲醇 乙腈 | ||
1.一種干血片中免疫抑制劑的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)將標準曲線干血片和待測干血片分別與提取液、內標溶液混合后提取，離心取上清液I；
(2)將所述上清液I吹干后用復溶液復溶，離心后取上清液II；
(3)將所述上清液II采用串聯質譜法進行檢測；
(4)根據標準樣本和內標物的出峰面積比值以及標準樣本濃度，線性回歸得到免疫抑制劑的標準曲線方程；
將待測樣本和內標物的出峰面積比值代入標準曲線方程，計算得出待測樣本中免疫抑制劑含量；
所述的提取液為甲醇和/或乙腈的水溶液；
所述的免疫抑制劑為環孢菌素A、他克莫司、雷帕霉素和依維莫司中的至少一種；
色譜條件為：洗脫液為甲醇和/或乙腈、甲酸銨或乙酸銨-甲酸或乙酸的水溶液、甲酸銨或乙酸銨-甲酸或乙酸的甲醇和/或乙腈溶液中的一種。
2.根據權利要求1所述的干血片中免疫抑制劑的檢測方法，其特征在于，步驟(1)中，標準曲線干血片的制備方法包括：取健康全血與標準品溶液混勻，再用健康全血依次稀釋成若干個標準品濃度呈梯度分布的混合液，分別將所述混合液點漬到濾紙上晾干即得；
所述的標準品包括環孢菌素A、他克莫司、雷帕霉素和依維莫司中的至少一種；
所述混合液中環孢菌素A的濃度為10～2000ng/ml；他克莫司、雷帕霉素、依維莫司的濃度均為0.5～100ng/ml。
3.根據權利要求1所述的干血片中免疫抑制劑的檢測方法，其特征在于，所述的提取液為甲醇水溶液。
4.根據權利要求1所述的干血片中免疫抑制劑的檢測方法，其特征在于，所述的內標溶液中含有環孢菌素A-d4和雷帕霉素-d3。
5.根據權利要求1所述的干血片中免疫抑制劑的檢測方法，其特征在于，步驟(3)中，色譜條件為：所述的洗脫液包括洗脫液A和洗脫液B，洗脫液A為2mmol/L乙酸銨-0.1％甲酸水溶液；洗脫液B為2mmol/L乙酸銨-0.1％甲酸甲醇溶液。
6.根據權利要求5所述的干血片中免疫抑制劑的檢測方法，其特征在于，采用梯度洗脫，洗脫參數見表1。
表1：梯度洗脫參數
7.根據權利要求1、5或6任一項所述的干血片中免疫抑制劑的檢測方法，其特征在于，色譜條件為：色譜柱為Waters ACQUITY UPLC BEH C182.1mm×50mm，1.7um；柱溫55℃，檢測時間為3min，進樣量為10μl。
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