[發(fā)明專利]一種沙漠原位微生物覆膜層的制備方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201810726151.3
• 申請日: 2018-07-04
• 公開（公告）號: CN108929703A
• 公開（公告）日: 2018-12-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 斯日古楞;高瑜;李馳;王翠艷;王燕星;王曉榮;劉昌軍
• 申請（專利權(quán)）人: 內(nèi)蒙古工業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C09K17/52
• 分類號: C09K17/52;C09K17/16;C09K105/00
• 代理公司: 合肥市澤信專利代理事務(wù)所(普通合伙) 34144
• 代理人: 方榮肖

1.一種沙漠原位微生物覆膜層的制備方法，其特征在于，其包括步驟：

步驟一：將沙漠自源菌CGMCC No.15633種子活化，逐級擴大培養(yǎng)；

沙漠自源菌的獲取：從內(nèi)蒙古沙漠中取地表30～50cm下的風(fēng)沙土，放入液體培養(yǎng)基中振蕩，制備成不同濃度的稀釋溶液，分別涂布于固體培養(yǎng)基上，進行恒溫培養(yǎng)，挑取單菌落反復(fù)劃線，純化培養(yǎng)3-5次，直至出現(xiàn)單菌落并選為所述沙漠自源礦化菌株；其中，所述液體培養(yǎng)基由10～15g酵母粉、0.01～0.1molCH₃COONa、0.05～0.1mol NH₄Cl、0.1～0.5mol CO(NH₂)₂組成；所述固體培養(yǎng)基由10～15g酵母粉、0.01～0.1molCH₃COONa、0.05～0.1mol0.1NH₄Cl、0.1～0.5mol CO(NH₂)₂、15～20g/L瓊脂粉組成；

步驟二：在待治理沙漠區(qū)內(nèi)噴灑沙漠自源生物膠結(jié)劑，待治理沙漠區(qū)的表層沙土在沙漠自源生物膠結(jié)劑的作用下形成微生物覆膜層；

其中，所述沙漠自源生物膠結(jié)劑包括沙漠自源菌液、膠結(jié)營養(yǎng)液以及膠結(jié)顆粒；所述沙漠自源菌液由沙漠自源菌經(jīng)過擴培而成；所述膠結(jié)營養(yǎng)液主要由CO(NH₂)₂、CaCl₂.2H₂O物質(zhì)組成；所述膠結(jié)顆粒主要成分為可降解高分子吸水聚合物；所述沙漠自源菌液在制備時，將所述沙漠自源礦化菌株按照5％的接種量接種至培養(yǎng)基中震蕩擴培制成菌液，其中，培養(yǎng)基成分為：10～30g/L酵母粉，2～10g/L NH₄SO₄，0～15.748g/L C₄H₁₁NO₃，0～3g/L NiC_l2；震蕩擴培后的菌液去除原有的培養(yǎng)基，再用新鮮的培養(yǎng)基稀釋，當(dāng)菌液的OD₆₀₀值為0.5～1.0時停止稀釋，獲得的菌液為所述沙漠自源菌液；

所述膠結(jié)顆粒以每平方米50-70克均勻噴灑入所述微生物覆膜沙土區(qū)內(nèi)；一平方米的所述微生物覆膜沙土區(qū)噴灑5-6升沙漠自源菌液，12-15升的所述膠結(jié)營養(yǎng)液；

以所述膠結(jié)顆粒噴灑日的后一日為第一日，在所述第一日，所述沙漠自源菌液和所述膠結(jié)營養(yǎng)液以體積比為1:2.5的比例交替進行噴灑，其交替順序為先噴灑所述沙漠自源菌液，再噴灑所述膠結(jié)營養(yǎng)液，依次交替進行，所述第一日的4小時內(nèi)共噴灑沙漠自源菌液與膠結(jié)營養(yǎng)液各2次；所述沙漠自源菌液與所述膠結(jié)營養(yǎng)液交替噴灑的間隔時間為1小時；第二、三、四日每日各自噴灑與第一日相同體積的膠結(jié)營養(yǎng)液。

2.如權(quán)利要求1所述的沙漠原位微生物覆膜層的制備方法，其特征在于，風(fēng)沙土放入液體培養(yǎng)基中振蕩為：

所述風(fēng)沙土放入液體培養(yǎng)基中振搖15～60min后靜置24h；

取上清液接種至新的所述液體培養(yǎng)基中，振蕩溫度30℃～35℃，150～200r/min，pH6.0～7.0，培養(yǎng)時長2d～3d，反復(fù)振蕩培養(yǎng)3次；

梯度稀釋成10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5稀釋度的土壤溶液作為所述不同濃度的稀釋溶液。

3.如權(quán)利要求1所述的沙漠原位微生物覆膜層的制備方法，其特征在于，去除原有的培養(yǎng)基的方式為：震蕩擴培后的菌液在30℃、200rpm條件下，離心20min。

4.如權(quán)利要求1所述的沙漠原位微生物覆膜層的制備方法，其特征在于，所述膠結(jié)營養(yǎng)液在制備時，配制完成時間保證在噴灑前不少于3個小時且不超過6個小時。