[發(fā)明專利]一種重組豬長效干擾素γ及制備此長效干擾素γ的融合蛋白及其制備方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201810725703.9
• 申請日: 2018-07-04
• 公開（公告）號: CN108794640A
• 公開（公告）日: 2018-11-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楊建偉;徐文俊;徐慕珍;付超;趙雨;高耀輝;周煒;王紅朵;郭志燕
• 申請（專利權(quán)）人: 安徽九川生物科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;C12N1/21;A61P31/12;A61P37/04;C12R1/19
• 代理公司: 蕪湖安匯知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 34107
• 代理人: 尹婷婷

本發(fā)明公開了一種重組豬長效干擾素γ及制備此長效干擾素γ的融合蛋白及其制備方法，所述融合蛋白由豬白細(xì)胞介素2與豬干擾素γ經(jīng)柔性linker連接而形成，融合蛋白與凍干保護劑混配后經(jīng)冷凍干燥即可得到重組豬長效干擾素γ。所述重組豬長效干擾素γ可顯著提高豬干擾素的半衰期，較普通豬干擾素γ的半衰期提高13倍以上，并具有廣譜抗病毒作用并能提高豬自身的免疫應(yīng)答。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物基因工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種重組豬長效干擾素γ及制備此長效干擾素γ的融合蛋白及其制備方法。

背景技術(shù)

近年來規(guī)模化集約化豬場在我國迅速興起,我國生豬存欄量和豬肉生產(chǎn)總量穩(wěn)居世界首位，傳統(tǒng)的豬病防治方法已遠(yuǎn)不能適應(yīng)大規(guī)模集約化養(yǎng)豬生產(chǎn)中傳染病的控制。我國近20年來新出現(xiàn)了近20種畜禽傳染病，加上原有的動物疫病，對我國養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。據(jù)不完全統(tǒng)計，我國每年因各種病毒性疾病引起畜禽死亡率高達(dá)15％-20％，經(jīng)濟損失達(dá)數(shù)十億元。

目前對豬病毒性疾病的預(yù)防和治療途徑主要是通過疫苗接種和使用抗生素，但由于養(yǎng)殖環(huán)境不完善，病毒變異以及機體抵抗力變化等原因，使傳統(tǒng)的預(yù)防和治療途徑受到了巨大挑戰(zhàn)，大部分抗生素類藥物以及傳統(tǒng)的口服抗病毒藥物，由于藥物殘留問題，給健康帶來負(fù)面影響；而傳統(tǒng)的疫苗，由于它的高特異性以及副作用，無法抵抗病毒變異和新型病毒不斷出現(xiàn)給豬養(yǎng)殖業(yè)帶來的巨大危害。

IFN是一類病毒感染誘導(dǎo)機體產(chǎn)生具有廣譜抗病毒、抗腫瘤和具有免疫調(diào)節(jié)作用的蛋白質(zhì)，1957年Issacs和Lindeman首先發(fā)現(xiàn)，它是一類多功能的細(xì)胞因子，與細(xì)胞受體結(jié)合后，可誘導(dǎo)機體產(chǎn)生多種特異性蛋白質(zhì)和酶類，主要通過抑制病毒基因轉(zhuǎn)錄和降解病毒RNA來抑制病毒的生長繁殖以及發(fā)揮抗腫瘤等的活性。按照IFN的產(chǎn)生細(xì)胞、生化特征及在機體免疫方面所發(fā)揮作用的不同，分為γ、β、γ三類。現(xiàn)已知，γ型IFN是由激活的T細(xì)胞和NK細(xì)胞產(chǎn)生，具有較強抗病毒和免疫調(diào)節(jié)功能。大量研究表明，干擾素γ除了具有廣譜抗病毒功能外，對免疫系統(tǒng)也起著關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用，所以IFN-γ又稱為免疫調(diào)節(jié)干擾素。雖然各種類型的干擾素均能夠介導(dǎo)細(xì)胞對病毒感染的反應(yīng)，但干擾素γ的免疫調(diào)節(jié)活性在協(xié)調(diào)免疫反應(yīng)和確定機體長期的抗病毒狀態(tài)中發(fā)揮更為重要的作用，因此干擾素γ具有極為重要的臨床應(yīng)用價值。

細(xì)胞因子IL-2即白細(xì)胞介素2，又名T細(xì)胞生長因子。主要由活化的T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的具有廣泛生物活性的細(xì)胞因子，既可以促進淋巴細(xì)胞增殖，增強免疫功能，又能限制T細(xì)胞反應(yīng)而增強機體的免疫耐受，故可用于治療腫瘤、感染性疾病和自身免疫性疾病。在獸醫(yī)中，由于IL-2能提高疫苗的免疫應(yīng)答和減少疾病的發(fā)生，也出現(xiàn)廣闊的應(yīng)用前景。IL-2因能增強機體的免疫水平，提高機體的抗病能力，因而用于細(xì)菌性、病毒性和寄生蟲性疾病的免疫治療。此外，IL-2還可影響藥物的代謝，使藥物的代謝時間延長，作用時間增加，從而提高藥物療效。IL-2與其他細(xì)胞因子根據(jù)基因構(gòu)建，組成融合蛋白，以增強疫苗的抗體產(chǎn)生和提高細(xì)胞免疫水平。

天然干擾素及人工重組干擾素目前普遍存在半衰期短的局限，半衰期一般為2-4個小時。半衰期短給治療帶來了極大的不便，治療次數(shù)的增加，相應(yīng)的時間成本及經(jīng)濟成本隨之增加，而機體的耐受極限也有可能被突破導(dǎo)致不良反應(yīng)的產(chǎn)生。半衰期短的主要原因有兩個：干擾素的分子量過小在體內(nèi)代謝過快，干擾素尤其是重組干擾素親和力較差被免疫系統(tǒng)清除。而市面上常見的長效干擾素以聚乙二醇融合干擾素為代表，僅在分子量的層面上部分解決了干擾素分子量小而導(dǎo)致半衰期短的問題，同時聚乙二醇融合干擾素成本非常高，不利于臨床上應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種重組豬長效干擾素γ及制備此長效干擾素γ的融合蛋白及其制備方法，所述重組豬長效干擾素γ可顯著提高豬干擾素的半衰期，較普通豬干擾素γ的半衰期提高13倍以上，并具有廣譜抗病毒作用并能提高豬自身的免疫應(yīng)答。

本發(fā)明采取的技術(shù)方案為：