[發明專利]一種重組豬長效干擾素及制備此長效干擾素的融合蛋白及其制備方法

在審

• 申請號: 201810725693.9
• 申請日: 2018-07-04
• 公開（公告）號: CN108840942A
• 公開（公告）日: 2018-11-20
• 發明（設計）人: 鮑可兵;徐慕珍;楊建偉;趙雨;夏兵兵;徐文俊;王亞男
• 申請（專利權）人: 安徽九川生物科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;C12N1/21;A61P31/12;A61P37/04;C12R1/19
• 代理公司: 蕪湖安匯知識產權代理有限公司 34107
• 代理人: 尹婷婷

本發明公開了一種重組豬長效干擾素及制備此長效干擾素的融合蛋白及其制備方法，所述融合蛋白由豬白細胞介素2與豬干擾素α經柔性linker連接而形成，融合蛋白與凍干保護劑混配后經冷凍干燥即可得到重組豬長效干擾素。所述重組豬長效干擾素可顯著提高豬干擾素的半衰期，較普通豬干擾素的半衰期提高15倍以上，具有廣譜抗病毒作用并能提高豬自身的免疫應答。

技術領域

本發明屬于生物基因工程技術領域，具體涉及一種重組豬長效干擾素及制備此長效干擾素的融合蛋白及其制備方法。

背景技術

近年來規模化集約化豬場在我國迅速興起，我國生豬存欄量和豬肉生產總量穩居世界首位，傳統的豬病防治方法已遠不能適應大規模集約化養豬生產中傳染病的控制。我國近20年來新出現了近20種畜禽傳染病，加上原有的動物疫病，對我國養殖業造成了巨大的經濟損失。據不完全統計，我國每年因各種病毒性疾病引起畜禽死亡率高達15％-20％，經濟損失達數十億元。

目前對豬病毒性疾病的預防和治療途徑主要是通過疫苗接種和使用抗生素，但由于養殖環境不完善，病毒變異以及機體抵抗力變化等原因，傳統的預防和治療途徑受到了巨大挑戰。大部分抗生素類藥物以及傳統的口服抗病毒藥物，由于藥物殘留問題，給健康帶來負面影響；而傳統的疫苗，由于它的高特異性以及副作用，無法抵抗病毒變異和新型病毒不斷出現給豬養殖業帶來的巨大危害。

IFN是一類病毒感染誘導機體產生具有廣譜抗病毒、抗腫瘤和具有免疫調節作用的蛋白質，1957年Issacs和Lindeman首先發現，它是一類多功能的細胞因子，與細胞受體結合后，可誘導機體產生多種特異性蛋白質和酶類，主要通過抑制病毒基因轉錄和降解病毒RNA來抑制病毒的生長繁殖以及發揮抗腫瘤等的活性。按照IFN的產生細胞、生化特征及在機體免疫方面所發揮作用的不同，分為α、β、γ三類。現已知，α型IFN在體內可有選擇性地作用于病毒等感染細胞，通過抑制受染細胞內的病毒蛋白質的生物合成，發揮廣譜和高效抗病毒作用。

IL-2即白細胞介素2，又名T細胞生長因子。主要由活化的T淋巴細胞產生的具有廣泛生物活性的細胞因子，既可以促進淋巴細胞增殖，增強免疫功能，又能限制T細胞反應而增強機體的免疫耐受，故可用于治療腫瘤、感染性疾病和自身免疫性疾病。在醫學領域上商品化的重組人IL-2已經用于腫瘤、艾滋病、乙型肝炎等疾病的治療。在獸醫中，由于IL-2能提高疫苗的免疫應答和減少疾病的發生，也出現廣闊的應用前景。

天然干擾素及人工重組干擾素目前普遍存在半衰期短的局限，半衰期一般為2-4個小時。半衰期短給治療帶來了極大的不便，治療次數的增加，相應的時間成本及經濟成本隨之增加，而機體的耐受極限也有可能被突破導致不良反應的產生。半衰期短的主要原因有兩個：干擾素的分子量過小在體內代謝過快，干擾素尤其是重組干擾素親和力較差被免疫系統清除。而市面上常見的長效干擾素以聚乙二醇融合干擾素為代表，僅在分子量的層面上部分解決了干擾素分子量小而導致半衰期短的問題，同時聚乙二醇融合干擾素成本非常高，不利于臨床上應用。

發明內容

為解決上述技術問題，本發明提供了一種重組豬長效干擾素及制備此長效干擾素的融合蛋白及其制備方法，所述重組豬長效干擾素可顯著提高豬干擾素的半衰期，較普通豬干擾素的半衰期提高15倍以上，具有廣譜抗病毒作用并能提高豬自身的免疫應答。

本發明采取的技術方案為：

一種由豬白細胞介素2與豬干擾素α組成的融合蛋白，所述融合蛋白的氨基酸序列表如SEQUENCELISTING 400〈1〉所示，記為融合蛋白1；或如SEQUENCE LISTING 400〈2〉所示，記為融合蛋白2。

本發明還提供了編碼上述融合蛋白的基因，所述基因的核苷酸序列表如SEQUENCELISTING 400〈3〉所示，記為基因組1；或如SEQUENCE LISTING 400〈4〉所示，記為基因組2。