[發(fā)明專利]一種重組羊長效干擾素γ及制備此長效干擾素γ的融合蛋白及其制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810725159.8
• 申請日: 2018-07-04
• 公開（公告）號: CN108840941A
• 公開（公告）日: 2018-11-20
• 發(fā)明（設計）人: 楊建偉;高耀輝;徐慕珍;周煒;王亞男;趙雨;徐文俊;付超
• 申請（專利權(quán)）人: 蕪湖英特菲爾生物制品產(chǎn)業(yè)研究院有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;C12N1/21;A61P31/12;A61P37/00;C12R1/19
• 代理公司: 蕪湖安匯知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 34107
• 代理人: 尹婷婷

本發(fā)明公開了一種重組羊長效干擾素γ及制備此長效干擾素γ的融合蛋白及其制備方法，所述融合蛋白由羊白細胞介素2與羊干擾素γ經(jīng)柔性linker連接而形成，融合蛋白與凍干保護劑混配后經(jīng)冷凍干燥即可得到重組羊長效干擾素γ。所述重組羊長效干擾素γ可顯著提高羊干擾素的半衰期，較普通羊干擾素γ的半衰期提高10倍以上，并具有廣譜抗病毒作用并能提高羊自身的免疫應答。

技術(shù)領域

本發(fā)明屬于生物基因工程技術(shù)領域，具體涉及一種重組羊長效干擾素γ及制備此長效干擾素γ的融合蛋白及其制備方法。

背景技術(shù)

由病毒引起的動物傳染性疾病嚴重制約了各個國家和地區(qū)養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展，中國是世界上羊存欄量、出欄量、羊肉產(chǎn)量最多的國家，肉羊產(chǎn)業(yè)也是我國畜牧業(yè)的重要支柱產(chǎn)業(yè)之一。隨著羊養(yǎng)殖業(yè)的持續(xù)發(fā)展，不可避免的要面對病毒引起的疾病的問題，畜類疾病不僅給羊養(yǎng)殖者造成巨大的經(jīng)濟損失，更為嚴重的是，一些人獸共患傳染性疾病還給人類健康帶來潛在威脅。

目前羊類傳染性疾病的防治主要采用疫苗免疫和藥物治療，由于疫苗免疫的血清型單一，而病毒的血清型復雜，毒株變異快，常導致疫苗免疫失敗。一些病毒病目前尚無疫苗可用，有些病毒也可能直接危害到人類的健康。

常用的藥物治療主要采用抗生素進行治療，但是近年來由于抗生素的廣泛和大量使用，導致耐藥性菌株大量產(chǎn)生，并通過食物鏈傳染給人，給人類健康帶來更大的威脅。現(xiàn)在一些國家己明令禁止一些抗生素和抗菌劑在養(yǎng)殖業(yè)中的應用。因此，使用干擾素來積極治療和預防家畜、家禽的病毒性疾病將是人類最為關注的問題。

IFN是一類病毒感染誘導機體產(chǎn)生具有廣譜抗病毒、抗腫瘤和具有免疫調(diào)節(jié)作用的蛋白質(zhì)，1957年Issacs和Lindeman首先發(fā)現(xiàn)，它是一類多功能的細胞因子，與細胞受體結(jié)合后，可誘導機體產(chǎn)生多種特異性蛋白質(zhì)和酶類，主要通過抑制病毒基因轉(zhuǎn)錄和降解病毒RNA來抑制病毒的生長繁殖以及發(fā)揮抗腫瘤等的活性。按照IFN的產(chǎn)生細胞、生化特征及在機體免疫方面所發(fā)揮作用的不同，分為γ、β、γ三類。現(xiàn)已知，γ型IFN是由激活的T細胞和NK細胞產(chǎn)生，具有較強抗病毒和免疫調(diào)節(jié)功能。大量研究表明，干擾素γ除了具有廣譜抗病毒功能外，對免疫系統(tǒng)也起著關鍵的調(diào)節(jié)作用，所以IFN-γ又稱為免疫調(diào)節(jié)干擾素。雖然各種類型的干擾素均能夠介導細胞對病毒感染的反應，但干擾素γ的免疫調(diào)節(jié)活性在協(xié)調(diào)免疫反應和確定機體長期的抗病毒狀態(tài)中發(fā)揮更為重要的作用，因此干擾素γ具有極為重要的臨床應用價值。

細胞因子IL-2即白細胞介素2，又名T細胞生長因子。主要由活化的T淋巴細胞產(chǎn)生的具有廣泛生物活性的細胞因子，既可以促進淋巴細胞增殖，增強免疫功能，又能限制T細胞反應而增強機體的免疫耐受，故可用于治療腫瘤、感染性疾病和自身免疫性疾病。在獸醫(yī)中，由于IL-2能提高疫苗的免疫應答和減少疾病的發(fā)生，也出現(xiàn)廣闊的應用前景。IL-2因能增強機體的免疫水平，提高機體的抗病能力，因而用于細菌性、病毒性和寄生蟲性疾病的免疫治療。此外，IL-2還可影響藥物的代謝，使藥物的代謝時間延長，作用時間增加，從而提高藥物療效。IL-2與其他細胞因子根據(jù)基因構(gòu)建，組成融合蛋白，以增強疫苗的抗體產(chǎn)生和提高細胞免疫水平。

天然干擾素及人工重組干擾素目前普遍存在半衰期短的局限，半衰期一般為2-4個小時。半衰期短給治療帶來了極大的不便，治療次數(shù)的增加，相應的時間成本及經(jīng)濟成本隨之增加，而機體的耐受極限也有可能被突破導致不良反應的產(chǎn)生。半衰期短的主要原因有兩個：干擾素的分子量過小在體內(nèi)代謝過快，干擾素尤其是重組干擾素親和力較差被免疫系統(tǒng)清除。而市面上常見的長效干擾素以聚乙二醇融合干擾素為代表，僅在分子量的層面上部分解決了干擾素分子量小而導致半衰期短的問題，同時聚乙二醇融合干擾素成本非常高，不利于臨床上應用。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種重組羊長效干擾素γ及制備此長效干擾素γ的融合蛋白及其制備方法，所述重組羊長效干擾素γ可顯著提高羊干擾素的半衰期，較普通羊干擾素γ的半衰期提高10倍以上，并具有廣譜抗病毒作用并能提高羊自身的免疫應答。