[發(fā)明專利]一種重組雞長效干擾素及制備此長效干擾素的融合蛋白及其制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810725156.4
• 申請(qǐng)日: 2018-07-04
• 公開（公告）號(hào): CN108864297A
• 公開（公告）日: 2018-11-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鮑可兵;楊建偉;趙雨;徐文俊;夏兵兵;徐慕珍;單雪芹;凡玉芳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蕪湖英特菲爾生物制品產(chǎn)業(yè)研究院有限公司
• 主分類號(hào): C07K19/00
• 分類號(hào): C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;C12N1/21;A61P31/12;A61P37/04
• 代理公司: 蕪湖安匯知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 34107
• 代理人: 尹婷婷

本發(fā)明公開了一種重組雞長效干擾素及制備此長效干擾素的融合蛋白及其制備方法，所述融合蛋白由雞白細(xì)胞介素2與雞干擾素α經(jīng)柔性linker連接而形成，融合蛋白與凍干保護(hù)劑混配后胡靜冷凍干燥即可得到重組雞長效干擾素。所述重組雞長效干擾素可顯著提高雞干擾素的半衰期，較普通雞干擾素的半衰期提高18倍以上，并具有廣譜抗病毒作用并能提高雞自身的免疫應(yīng)答。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物基因工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種重組雞長效干擾素及制備此長效干擾素的融合蛋白及其制備方法。

背景技術(shù)

近年來，隨著養(yǎng)殖業(yè)的規(guī)模化和畜禽及其產(chǎn)品流通業(yè)迅速的發(fā)展，我國家禽業(yè)取得長足發(fā)展，形成了年產(chǎn)值逾千億元的巨大產(chǎn)業(yè)。然而由于我國薄弱的動(dòng)物防疫體系，禽病仍然是我國家禽生產(chǎn)面臨的嚴(yán)重問題，這已經(jīng)成為制約我國禽類養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的重要因素。禽病多、損失大，死亡率高于15％，死淘率達(dá)20％～25％(發(fā)達(dá)國家不足5％)，我國養(yǎng)雞業(yè)每年由于傳染病所導(dǎo)致的雞只死亡數(shù)量約為3億只，直接造成的經(jīng)濟(jì)損失約30億元，造成的間接損失約100億元。

目前對(duì)于雞病毒性疾病的預(yù)防和治療主要采用的是疫苗免疫和藥物治療，由于疫苗免疫的血清型單一，病毒血清型眾多且病毒毒株變異速度快，從而經(jīng)常導(dǎo)致疫苗免疫失敗。盡管一些抗生素和化學(xué)合成的抗病毒藥物對(duì)少數(shù)病毒有一些作用，但由于藥物殘留經(jīng)食物鏈給人類健康帶來負(fù)面影響，我國從16年開始明令禁止一些抗生素和抗菌劑在養(yǎng)殖業(yè)中的應(yīng)用。因此，積極研制生產(chǎn)無毒副作用、無藥物殘留和不產(chǎn)生耐藥性的干擾素制劑，對(duì)目前雞病毒性疾病預(yù)防和治療困境有著重要的臨床意義。

IFN是一類病毒感染誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生具有廣譜抗病毒、抗腫瘤和具有免疫調(diào)節(jié)作用的蛋白質(zhì)，1957年Issacs和Lindeman首先發(fā)現(xiàn)，它是一類多功能的細(xì)胞因子，與細(xì)胞受體結(jié)合后，可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生多種特異性蛋白質(zhì)和酶類，主要通過抑制病毒基因轉(zhuǎn)錄和降解病毒RNA來抑制病毒的生長繁殖以及發(fā)揮抗腫瘤等的活性。按照IFN的產(chǎn)生細(xì)胞、生化特征及在機(jī)體免疫方面所發(fā)揮作用的不同，分為α、β、γ三類。現(xiàn)已知，α型IFN在體內(nèi)可有選擇性地作用于病毒等感染細(xì)胞，通過抑制受染細(xì)胞內(nèi)的病毒蛋白質(zhì)的生物合成，發(fā)揮廣譜和高效抗病毒作用。

IL-2即白細(xì)胞介素2，又名T細(xì)胞生長因子。主要由活化的T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的具有廣泛生物活性的細(xì)胞因子，既可以促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖，增強(qiáng)免疫功能，又能限制T細(xì)胞反應(yīng)而增強(qiáng)機(jī)體的免疫耐受，故可用于治療腫瘤、感染性疾病和自身免疫性疾病。在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域上商品化的重組人IL-2已經(jīng)用于腫瘤、艾滋病、乙型肝炎等疾病的治療。在獸醫(yī)中，由于IL-2能提高疫苗的免疫應(yīng)答和減少疾病的發(fā)生，也出現(xiàn)廣闊的應(yīng)用前景。

天然干擾素及人工重組干擾素目前普遍存在半衰期短的局限，半衰期一般為2-4個(gè)小時(shí)。半衰期短給治療帶來了極大的不便，治療次數(shù)的增加，相應(yīng)的時(shí)間成本及經(jīng)濟(jì)成本隨之增加，而機(jī)體的耐受極限也有可能被突破導(dǎo)致不良反應(yīng)的產(chǎn)生。半衰期短的主要原因有兩個(gè)：干擾素的分子量過小在體內(nèi)代謝過快，干擾素尤其是重組干擾素親和力較差被免疫系統(tǒng)清除。而市面上常見的長效干擾素以聚乙二醇融合干擾素為代表，僅在分子量的層面上部分解決了干擾素分子量小而導(dǎo)致半衰期短的問題，同時(shí)聚乙二醇融合干擾素成本非常高，不利于在家禽臨床上應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種重組雞長效干擾素及制備此長效干擾素的融合蛋白及其制備方法，所述重組雞長效干擾素可顯著提高雞干擾素的半衰期，較普通雞干擾素的半衰期提高18倍以上，并具有廣譜抗病毒作用并能提高雞自身的免疫應(yīng)答。

本發(fā)明采取的技術(shù)方案為：

一種由雞白細(xì)胞介素2與雞干擾素α組成的融合蛋白，所述融合蛋白的氨基酸序列表如SEQUENCE LISTING 400〈1〉所示。

本發(fā)明還提供了編碼上述融合蛋白的基因，所述基因的核苷酸序列表如SEQUENCELISTING 400〈2〉所示，記為基因組1；或如SEQUENCE LISTING 400〈3〉所示，記為基因組2。