[發明專利]一種重組羊長效干擾素及制備此長效干擾素的融合蛋白及其制備方法

在審

• 申請號: 201810725146.0
• 申請日: 2018-07-04
• 公開（公告）號: CN108864296A
• 公開（公告）日: 2018-11-23
• 發明（設計）人: 鮑可兵;徐慕珍;楊建偉;郭志燕;趙雨;徐文俊;夏兵兵;單雪芹
• 申請（專利權）人: 蕪湖英特菲爾生物制品產業研究院有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;C12N1/21;A61P31/12;A61P37/04
• 代理公司: 蕪湖安匯知識產權代理有限公司 34107
• 代理人: 尹婷婷

1.一種由羊白細胞介素2與羊干擾素τ組成的融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白的氨基酸序列表如SEQUENCE LISTING 400〈1〉所示。

2.一種編碼如權利要求1所述的融合蛋白的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列表如SEQUENCE LISTING 400〈2〉所示，記為基因組1；或如SEQUENCE LISTING 400〈3〉所示，記為基因組2。

3.含有如權利要求2所述基因的表達載體。

4.含有如權利要求2所述基因的基因工程菌。

5.一種重組羊長效干擾素，其特征在于，所述重組羊長效干擾素由權利要求1所述的融合蛋白與凍干保護劑混配之后，經冷凍干燥而成。

6.根據權利要求1所述的融合蛋白的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟：將權利要求3所述的表達載體導入到大腸桿菌宿主細胞中，獲得基因工程菌，基因工程菌經IPTG誘導表達后得到所述融合蛋白的粗品，經純化后即可得到融合蛋白。

7.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述基因工程菌為pET-32a/rIL2-IFNτ，其制備方法為：

(1)設計引物，通過反轉錄得到或者人工合成連接有柔性linker序列的羊白細胞介素2和羊干擾素τ的目的基因；通過柔性linker將羊白細胞介素2和羊干擾素τ的目的基因連接起來，目的基因的核苷酸序列表如SEQUENCE LISTING 400〈2〉所示或如SEQUENCE LISTING400〈3〉所示；

(2)將連接后的目的基因連接到pET-32a質粒上獲得表達載體；

(3)將表達載體導入到大腸桿菌宿主細胞中，即可得到基因工程菌pET-32a/rIL2-IFNτ。

8.根據權利要求6或7所述的制備方法，其特征在于，所述大腸桿菌宿主細胞為BL21(DE3)感受態細胞或帶有pGro7質粒的BL21(DE3)感受態細胞。

9.根據權利要求6或7所述的制備方法，其特征在于，所述純化的方法為：融合蛋白的粗品先后經親和層析、陰離子交換層析和分子篩層析純化。

10.根據權利要求5所述的重組羊長效干擾素的應用，其特征在于，所述重組豬長效干擾素的半衰期長達33小時以上，具有光譜抗病毒作用并能提高豬自身的免疫應答。