[發(fā)明專利]馬鈴薯黃矮病毒的聯(lián)合基因檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810721894.1
• 申請(qǐng)日: 2018-07-04
• 公開（公告）號(hào): CN108660256B
• 公開（公告）日: 2021-11-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 沈建國(guó);高芳鑾;張永江;陳細(xì)紅;廖富榮
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 福州海關(guān)技術(shù)中心
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;陳曉慶

1.用于檢測(cè)或輔助檢測(cè)馬鈴薯黃矮病毒的成套試劑，為如下（1）或（2）：

（1）成套試劑甲；

（2）由成套試劑甲和成套試劑乙組成；

所述成套試劑甲由特異引物對(duì)甲和熒光探針甲組成，

所述成套試劑乙由特異引物對(duì)乙和熒光探針乙組成，

所述特異引物對(duì)甲由引物PYDV-f1和引物PYDV-r1組成，

所述熒光探針甲為探針PYDV-Probe1，

所述特異引物對(duì)乙由引物PYDV-f2和引物PYDV-r2組成，

所述熒光探針乙為探針PYDV-Probe2，

所述引物PYDV-f1為序列表中序列1所示的單鏈DNA分子，

所述引物PYDV-r1為序列表中序列2所示的單鏈DNA分子，

所述探針PYDV-Probe1為序列表中序列3所示的單鏈DNA分子，

所述引物PYDV-f2為序列表中序列4所示的單鏈DNA分子，

所述引物PYDV-r2為序列表中序列5所示的單鏈DNA分子，

所述探針PYDV-Probe2為序列表中序列6所示的單鏈DNA分子。

2.如權(quán)利要求1所述的成套試劑，其特征在于：所述探針PYDV-Probe1和所述探針PYDV-Probe2的5’端均標(biāo)記有熒光集團(tuán)；

所述探針PYDV-Probe1和所述探針PYDV-Probe2的3’端均標(biāo)記有淬滅集團(tuán)。

3.如權(quán)利要求1或2所述的成套試劑，其特征在于：所述成套試劑甲中，所述引物PYDV-f1、所述引物PYDV-r1和所述探針PYDV-Probe1的摩爾比為2:2:1；

所述成套試劑乙中，所述引物PYDV-f2、所述引物PYDV-r2和所述探針PYDV-Probe2的摩爾比為2:2:1。

4.權(quán)利要求1-3任一所述的成套試劑在如下c1）-c6）中任一所述的應(yīng)用：

c1）制備用于檢測(cè)或輔助檢測(cè)馬鈴薯黃矮病毒的產(chǎn)品；

c2）檢測(cè)或輔助檢測(cè)馬鈴薯黃矮病毒；

c3）制備用于鑒定或輔助鑒定待測(cè)病毒是否為馬鈴薯黃矮病毒的產(chǎn)品；

c4）鑒定或輔助鑒定待測(cè)病毒是否為馬鈴薯黃矮病毒；

c5）制備用于檢測(cè)或輔助檢測(cè)待測(cè)樣品是否感染馬鈴薯黃矮病毒的產(chǎn)品；

c6）檢測(cè)或輔助檢測(cè)待測(cè)樣品是否感染馬鈴薯黃矮病毒。

5.含有權(quán)利要求1-3任一所述成套試劑的試劑盒；

所述試劑盒的功能為如下d1）-d3）中任一種：

d1）檢測(cè)或輔助檢測(cè)馬鈴薯黃矮病毒；

d2）鑒定或輔助鑒定待測(cè)病毒是否為馬鈴薯黃矮病毒；

d3）檢測(cè)或輔助檢測(cè)待測(cè)樣品是否感染馬鈴薯黃矮病毒。

6.如權(quán)利要求5所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括含有馬鈴薯黃矮病毒的陽(yáng)性對(duì)照樣品和不含有馬鈴薯黃矮病毒的陰性對(duì)照樣品。

7.一種鑒定或輔助鑒定待測(cè)病毒是否為馬鈴薯黃矮病毒的方法，包括如下步驟：以待測(cè)病毒的cDNA為模板，采用權(quán)利要求1-3任一所述的成套試劑進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR；

若待測(cè)病毒的Ct值35時(shí)，則所述待測(cè)病毒為馬鈴薯黃矮病毒；

若待測(cè)病毒的Ct值40時(shí)，則所述待測(cè)病毒不為馬鈴薯黃矮病毒；

若待測(cè)病毒的35≤Ct值≤40時(shí)，則以所述待測(cè)病毒的cDNA為模板，采用權(quán)利要求1-3任一所述的成套試劑重新進(jìn)行測(cè)試：若重新測(cè)試的Ct值＜40，則所述待測(cè)病毒為馬鈴薯黃矮病毒；若重新測(cè)試的Ct值≥40時(shí)，則所述待測(cè)病毒不為馬鈴薯黃矮病毒。