[發明專利]經遺傳修飾的非人動物及其使用方法

有效

• 申請號: 201810721840.5
• 申請日: 2013-09-06
• 公開（公告）號: CN108782459B
• 公開（公告）日: 2021-11-05
• 發明（設計）人: R·A·弗拉維爾;M·曼茨;A·龍沃;T·施特羅維希;T·維林格;A·J·墨菲;S·史蒂文斯;G·雅克波羅斯
• 申請（專利權）人: 再生元制藥公司;耶魯大學;生物醫學研究院
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;A01K67/027
• 代理公司: 北京龍雙利達知識產權代理有限公司 11329
• 代理人: 孫濤;肖鸝

1.一種移植人癌細胞的方法，其包括：

將人癌細胞移植入經遺傳修飾的免疫缺陷小鼠；并

將人造血細胞移植入所述經遺傳修飾的免疫缺陷小鼠，

其中所述經遺傳修飾的免疫缺陷小鼠在其基因組中包含重組活化基因2(Rag2)基因敲除、IL2受體γ鏈(IL2rg)基因敲除、編碼人M-CSF多肽的核酸在小鼠M-CSF基因基因座處對小鼠M-CSF基因的替換、編碼人IL-3多肽的核酸在小鼠IL-3基因基因座處對小鼠IL-3基因的替換、編碼人GM-CSF多肽的核酸在小鼠GM-CSF基因基因座處對小鼠GM-CSF基因的替換、編碼人SIRPA多肽的核酸的插入和編碼人TPO多肽的核酸在小鼠TPO基因基因座處對小鼠TPO基因的替換，其中編碼人M-CSF、人IL-3、人GM-CSF、人SIRPA和人TPO的核酸中每種與啟動子可操作連接，且其中所述小鼠表達人M-CSF多肽、人IL-3多肽、人GM-CSF多肽、人SIRPA多肽和人TPO多肽。

2.權利要求1的方法，其中所述人癌細胞是自患者分離的原代人癌細胞。

3.權利要求2的方法，其中所述人癌細胞和所述人造血細胞是自同一患者分離的。

4.權利要求1的方法，其中所述人癌細胞來自癌細胞系。

5.權利要求1-4任一項的方法，其中所述人癌細胞選自白血病細胞、乳腺癌細胞、肺癌細胞和黑素瘤細胞。

6.權利要求1-4任一項的方法，其中所述人SIRPA多肽是全長人SIRPA多肽的生物學活性片段。

7.權利要求1-4任一項的方法，其中所述人SIRPA多肽是融合蛋白。

8.權利要求1-4任一項的方法，其中所述人SIRPA多肽是融合蛋白，其包含全長人SIRPA多肽的生物學活性片段。

9.權利要求1-4任一項的方法，其中所述編碼人M-CSF多肽、人IL-3多肽、人GM-CSF多肽、人SIRPA多肽和人TPO多肽的核酸分別與天然小鼠M-CSF啟動子、IL-3啟動子、GM-CSF啟動子、SIRPA啟動子和TPO啟動子可操作連接。

10.權利要求1-4任一項的方法，其中所述人造血細胞包含CD34+細胞。

11.一種移入人造血細胞的方法，其包括：

將至少一種人造血細胞施用于經遺傳修飾的免疫缺陷小鼠，其中所述經遺傳修飾的免疫缺陷小鼠在其基因組中包含重組活化基因2(Rag2)基因敲除、IL2受體γ鏈(IL2rg)基因敲除、編碼人M-CSF多肽的核酸在小鼠M-CSF基因基因座處對小鼠M-CSF基因的替換、編碼人IL-3多肽的核酸在小鼠IL-3基因基因座處對小鼠IL-3基因的替換、編碼人GM-CSF多肽的核酸在小鼠GM-CSF基因基因座處對小鼠GM-CSF基因的替換、編碼人SIRPA多肽的核酸的插入和編碼人TPO多肽的核酸在小鼠TPO基因基因座處對小鼠TPO基因的替換，其中編碼人M-CSF、人IL-3、人GM-CSF、人SIRPA和人TPO的核酸中每種與啟動子可操作連接，且其中所述小鼠表達人M-CSF多肽、人IL-3多肽、人GM-CSF多肽、人SIRPA多肽和人TPO多肽。

12.權利要求11的方法，其中所述方法不包括在所述施用之前亞致死照射所述經遺傳修飾的免疫缺陷小鼠或用放射模擬藥物處理所述經遺傳修飾的免疫缺陷小鼠。

13.權利要求11或12的方法，其中所述人SIRPA多肽是全長人SIRPA多肽的生物學活性片段。

14.權利要求11或12的方法，其中所述人SIRPA多肽是融合蛋白。