[發明專利]一種鴨呼腸孤病毒精制卵黃抗體的制備方法

在審

• 申請號: 201810720764.6
• 申請日: 2018-07-03
• 公開（公告）號: CN108794627A
• 公開（公告）日: 2018-11-13
• 發明（設計）人: 張立武;趙光偉;周宇;邵驁俊;李來旭;張思旺;李閣
• 申請（專利權）人: 重慶永健生物技術有限責任公司
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C07K16/06;A61K39/42;A61P31/14
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• 代理人: 暫無信息

1.一種鴨呼腸孤病毒精制卵黃抗體的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

步驟S1，按照毒種標準生產和挑選毒種；

步驟S2，將毒種進行稀釋后接種，經過檢驗后后提取抗原；

步驟S3，將抗原檢驗后，經過濃縮、油相制備和水相制備后變成免疫抗原，免疫抗原經過檢驗合格后，將免疫抗原注射給合格的蛋雞；

步驟S4，將蛋雞產的雞蛋經過消毒、分離卵黃、稀釋、酸化和萃取后提取抗體原液；

步驟S5，將抗體原液進行過濾、濃縮、滅活、分裝后獲得精制卵黃抗體；

步驟S6，將精制卵黃抗體的性狀和裝量檢驗合格后，對精制卵黃抗體的性狀和裝量檢驗，然后對精制卵黃抗體進行無菌檢驗、支原體檢驗、外源病毒檢驗和安全檢驗合格后，進行效力檢驗，檢驗合格后獲得合格的鴨呼腸孤病毒精制卵黃抗體。

2.如權利要求1所述的一種鴨呼腸孤病毒精制卵黃抗體的制備方法，其特征在于：所述步驟S1中生產和檢驗用毒種均為鴨呼腸孤病毒JS株。

3.如權利要求1所述的一種鴨呼腸孤病毒精制卵黃抗體的制備方法，其特征在于：所述步驟S2的具體操作步驟如下：將毒種用滅菌生理鹽水進行稀釋，然后將稀釋后的毒中接種到鴨胚中，鴨胚用碘酊消毒蛋殼表面氣室部，無菌操作除去氣室部蛋殼，收獲胚液，置于滅菌容器內，標記，即為抗原。

4.如權利要求1所述的一種鴨呼腸孤病毒精制卵黃抗體的制備方法，其特征在于：所述步驟S3的具體操作步驟如下：將檢驗合格的抗原后進行解凍，然后將抗體原液進行滅活，滅活的濃縮抗原接種SPF鴨胚中，通過油相制備的方法制得滅菌的吐溫-80備用，然后將滅菌的吐溫-80和滅活的濃縮抗原進行水相制備，將乳化后的原液標記為免疫抗原，免疫抗原經過檢驗后，注射到合格的產蛋雞中。

5.如權利要求1所述的一種鴨呼腸孤病毒精制卵黃抗體的制備方法，其特征在于：所述步驟S4的具體操作步驟如下：將蛋殼有糞污的高免雞蛋單獨挑出，用純化水清洗干凈，連同蛋殼潔凈的高免雞蛋一起擺入潔凈的塑料蛋托，然后手工或機械打蛋，除去蛋清、胚盤和系帶，收集卵黃，將卵黃轉入夾層反應罐中，攪拌呈膏狀，加入注射用水，攪拌均勻，加入酸化水，攪拌均勻后降溫至4℃，靜置至少12小時，吸取上清液，轉入攪拌罐中，加入終濃度為1.0％的辛酸，攪拌均勻，作用至少5小時，此時上層為卵黃固態物、下層為澄清的抗體液，收集約80～90％的下層抗體液，用孔徑為1μm的筒式濾芯過濾，收集濾液；將罐內剩余物攪拌均勻，用連續管式離心機離心，收集離心液，合并濾液和離心液。

6.如權利要求1所述的一種鴨呼腸孤病毒精制卵黃抗體的制備方法，其特征在于：所述步驟S5的具體操作步驟如下：將抗體原液用1～2M的氫氧化鈉溶液調節pH值為5.50～7.50，用孔徑為0.45μm的筒式濾芯過濾澄清，用孔徑為0.22μm筒式濾芯過濾除菌，根據高免雞蛋的鴨呼腸孤病毒中和抗體效價，濾液用截留分子量為50KD的中空纖維超濾器進行適當倍數的濃縮，預計使濃縮液的鴨呼腸孤病毒中和抗體效價≥1:128，濃縮液加入終濃度為0.05％的甲醛溶液，攪拌均勻，用孔徑為0.22μm筒式濾芯過濾除菌、分裝、軋蓋，于2～8℃保存，進而獲得精制卵黃抗體。

7.如權利要求1所述的一種鴨呼腸孤病毒精制卵黃抗體的制備方法，其特征在于：所述油相制備的操作步驟如下：取94份注射用白油，加入2份硬脂酸鋁，邊加邊攪拌，加熱直至完全透明，再加入6份司本-80，充分混勻，115℃高壓滅菌30min，冷卻至室溫，備用。

8.如權利要求5所述的一種鴨呼腸孤病毒精制卵黃抗體的制備方法，其特征在于：所述注射用水的體積和卵黃體積相等，加入所述酸化水的體積為所述卵黃體積的7倍。

9.如權利要求4所述的一種鴨呼腸孤病毒精制卵黃抗體的制備方法，其特征在于：所述水相制備的具體操作步驟如下：滅活的濃縮抗原96份加入4份滅菌的吐溫-80，充分振搖后使吐溫-80完全溶解。

10.如權利要求4所述的一種鴨呼腸孤病毒精制卵黃抗體的制備方法，其特征在于：在接種過程中選取的鴨胚為發育良好的11日齡易感鴨胚。