[發(fā)明專利]具有雙抗原夾心和雙檢測線的豬瘟病毒抗體定量檢測試紙卡

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810720514.2
• 申請日: 2018-07-04
• 公開（公告）號: CN108957002B
• 公開（公告）日: 2021-08-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉錫玲;龍興權(quán);代娟;李佳;黃雙龍;李筱雯;況世昌;吳貝
• 申請（專利權(quán)）人: 武漢觀銳生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/569
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務(wù)所(普通合伙) 42001
• 代理人: 張紅兵

本發(fā)明屬于動物免疫檢測領(lǐng)域，具體涉及具有雙抗原夾心和雙檢測線的豬瘟病毒抗體定量檢測試紙卡。該試紙卡包括樣品墊、豬瘟病毒E2蛋白金標墊、兔IgG金標墊、吸水墊、包被豬瘟病毒E2a蛋白的雙檢測線、羊抗兔IgG的質(zhì)控線的硝酸纖維素膜和PVC膠板；膠體金采用雙抗原夾心和雙檢測線；豬瘟病毒蛋白金標墊上包被有保藏號為CCTCC NO:M2018060的大腸桿菌BL21/pE2分泌的蛋白抗原構(gòu)建的豬瘟病毒金標E2抗原和金標兔IgG；所述的硝酸纖維素膜上包被有保藏號為CCTCC NO:M2018059的大腸桿菌BL21/pE2a分泌的蛋白抗原構(gòu)建的豬瘟病毒E2a抗原，構(gòu)成一雙檢測線區(qū)和羊抗兔IgG構(gòu)成的質(zhì)控線區(qū)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于動物免疫應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域。具體涉及一種具有雙抗原夾心和雙檢測線的豬瘟病毒抗體定量檢測試紙卡。

本發(fā)明的試紙卡可用于對豬瘟病毒抗體進行實時、快速的定量檢測，對豬群健康水平、免疫后的抗體水平監(jiān)測具有重要意義。

背景技術(shù)

豬瘟(classical Swine fever，CSF)是由豬瘟病毒(classical Swine fevervirus，CSFV)引起的一種急性、熱性、高接觸性的豬傳染病。豬瘟病毒主要通過消化道和呼吸道傳染，其傳播速度快，發(fā)病率和死亡率高，給全球養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟損失，被世界動物衛(wèi)生組織(OIE)列為16種A類法定通報的動物傳染病之一。多年來豬瘟也危害我國養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展，是目前發(fā)生最多、危害最大、流行最廣的傳染病之一，我國農(nóng)業(yè)部將其法定為一類傳染病。

豬瘟是一種急性烈性傳染病，我國對豬瘟的成功控制主要依賴于疫苗免疫。因此，疫苗免疫效果的優(yōu)劣對豬瘟的防控起到?jīng)Q定性作用。豬瘟抗體水平的檢測是疫苗免疫效果評價的主要方法，同時豬瘟抗體水平檢測對于豬瘟免疫疫苗程序的制訂也具有重要意義。

血清學(xué)檢測通常用于了解豬的群體免疫水平，對疫苗免疫效果進行評價。常用的檢測方法有豬瘟正向間接血凝實驗、病毒中和試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗等技術(shù)。其中間接血凝主觀性強、檢測效率低，不適合大批樣品檢測。酶聯(lián)免疫吸附試驗敏感性高、重復(fù)性好，但容易出現(xiàn)非特異性反應(yīng)，且僅用于定性或者半定量檢測。傳統(tǒng)的豬瘟抗體定量測定方法是病毒中和試驗，但此實驗需要培養(yǎng)有感染能力的豬瘟病毒，沒有資質(zhì)的實驗室難以開展此實驗。且這些方法對操作人員、設(shè)備等有較高的要求，大多耗時較長(如血凝抑制試驗需1～2小時；ELISA試驗需2～3小時等)，不便于實時、快速診斷，所以均無法在基層大范圍地推廣使用。

膠體金免疫層析(gold-immunochromatography assay GICA)是以膠體金作為示蹤物，基于膠體金標記技術(shù)應(yīng)用于抗原抗體反應(yīng)的一種免疫標記技術(shù)。其核心技術(shù)是以硝酸纖維素膜為固相載體，因毛細管作用而促使樣品溶液在層析條上泳動，并使樣品中的待檢物與層析膜上針對待檢物的受體(如抗原或抗體)在短時間內(nèi)發(fā)生高特異性、高親和性的免疫反應(yīng)。它具有簡便，快速，特異性強，靈敏度高，費用低的優(yōu)點。

基于該技術(shù)，中國發(fā)明專利申請2008100004492公開一種快速檢測豬瘟抗體的試紙條，該試紙條是通過肉眼判斷檢測線的有或無，來對豬瘟抗體進行陰性或陽性的定性檢測，因而無法準確量化抗體含量；中國發(fā)明專利申請201610454481.2公開了一種快速定量檢測豬瘟抗體的試紙盒及其制備方法，該試劑盒采用豬瘟E2和E0融合抗原分別作為標記抗原和捕獲抗原，采用單檢測線技術(shù)測定豬瘟病毒抗體含量，其樣品濃度的定量檢測線性范圍具有一定的局限性。在常規(guī)的單檢測線模式中，抗原抗體僅能夠在有限區(qū)域反應(yīng)，同時由于吸水墊和硝酸纖維素膜造成的樣品液泳動迅速，導(dǎo)致抗原抗體反應(yīng)時間短暫，使得檢測線顯色不明顯，或?qū)Ω吆繖z測物定量檢測顏色差異度不顯著。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有膠體金快速檢測方法對定性檢測或半定量以及定量檢測方法中的靈敏度低和檢測顏色差異度不顯著的缺點，提供一種具有雙抗原和雙檢測線的豬瘟病毒抗體定量檢測試紙卡與應(yīng)用。