[發明專利]一種豬圓環病毒二價基因工程疫苗

有效

• 申請號: 201810717823.4
• 申請日: 2018-07-03
• 公開（公告）號: CN109053896B
• 公開（公告）日: 2021-08-17
• 發明（設計）人: 李殿明;蒲勤;張曉丹;田春輝;齊春梅;劉甜甜;任百亮;張導春;吳啟凡;黨將將
• 申請（專利權）人: 青島明勤生物科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;A61K39/295;A61K39/12;A61P31/20
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明涉及一種豬圓環病毒二價基因工程疫苗的制備。所述疫苗包含PCV1結構蛋白Cap蛋白亞單位、PCV3結構蛋白Cap蛋白、豬白細胞介素?5及純化標簽。本疫苗制備工藝穩定，適合大規模生產。動物試驗表明，本發明所述的豬圓環病毒二價基因工程疫苗具有良好的安全性，且能夠誘導動物機體產生較強的免疫反應，有效預防豬圓環病毒1型和3型的感染。

技術領域

本發明屬于生物技術基因工程領域，涉及一種用于預防豬圓環病毒1型和豬圓環病毒3型的融合蛋白。具體地，利用基因重組技術，將豬圓環病毒1型Cap蛋白亞單位、豬圓環病毒3型Cap蛋白與分子佐劑IL-5串聯，并克隆入載體，轉化宿主菌，經過發酵、純化、乳化等工藝得到一種豬圓環病毒二價基因工程疫苗以及該疫苗在預防豬圓環病毒1型和豬圓環病毒3型中的應用。

背景技術

豬圓環病毒（Porcine circovirus，PCV）屬圓環病毒科圓環病毒屬，是一種環形單鏈DNA病毒。PCV基因組大小約為1.7kb，Cap蛋白是PCV的唯一結構蛋白，與其免疫相關（楊克禮等，2017）。傳統上將PCV分為PCV-1和PCV-2兩種血清型，兩種血清型感染均可造成繁殖障礙，導致母豬返情率增加、產木乃伊胎、流產以及死產和產弱仔等，雖然臨床上PCV-2引起的繁殖障礙更嚴重，但PCV-1在正常豬群及豬源細胞中污染率卻極高，給臨床防治帶來極大挑戰。

2016年美國學者 Palinski 等報道在患有PDNS的豬群中發現了一種新型的豬圓環病毒，命名為豬圓環病毒3型 (PCV-3)。PCV-3基因組包含2000堿基，具有與PCV-1和PCV-2相似的基因組結構，主要編碼Cap和Rep兩個基因。自PCV-3在美國發現以來，中國、韓國、波蘭、巴西和意大利等國家地區也相繼報道了該病毒的流行，大范圍的檢測發現，該病原可以在我國的8個省以及1個直轄市檢測到，臨床表現出局部典型的豬皮炎腎病綜合征病變，包括壞死性血管炎、腎炎、肉芽腫性淋巴腺炎、支氣管間質性肺炎。

白介素-5（Interleukin-2,IL-5）曾被稱為B細胞生長因子、T細胞替代因子，是由THC第二亞型在PPD等刺激后產生的一種含有N-乙酰氨基半乳糖殘基的弱酸性糖蛋白，具有促進B細胞分化與生長、誘導嗜酸性粒細胞分化、誘導細胞毒T細胞(CTL)生成的作用，是一種具有多種生物學功能的淋巴因子。

目前尚無國內或國際注冊的PCV-3疫苗以及PCV-1與PCV-3二價疫苗。

發明內容

本發明根據結構蛋白在PCV病毒感染中的作用，選擇PCV-1 Cap蛋白亞單位和PCV-3 Cap蛋白作為疫苗框架結構，通過柔性Linker連接后再與白介素-5串聯，克隆入pRSETB載體后轉化大腸桿菌，經過發酵、純化、乳化等工藝，獲得具有理想免疫原性的豬圓環病毒二價基因工程疫苗。利用本發明制備的疫苗可以有效預防豬圓環病毒1型和豬圓環病毒3型的感染。

優選地，本發明所述PCV-1 Cap蛋白亞單位，選自SEQ ID No.4的氨基酸序列或其功能等價物。

優選地，本發明所述PCV-3 Cap蛋白，選自SEQ ID No. 6的氨基酸序列或其功能等價物。

優選地，本發明所述白介素-5，選自SEQ ID No. 8的氨基酸序列或其功能等價物。

本發明所述融合蛋白還包含藥學上可接受的鹽以及表達所需要的載體。

所述疫苗也包括非免疫活性物質，即為各多肽的連接部分，不具有抗原表位的免疫原性，也不具有任何佐劑活性，主要有純化標簽、接頭肽、化學修飾部分等。

本發明所提供的豬圓環病毒二價基因工程疫苗具有良好安全性，臨床上有較高免疫原性，刺激動物體產生高水平特異性抗體，有效預防豬圓環病毒1型和豬圓環病毒3型的感染。

附圖說明

下列附圖用于說明本發明的具體實施方案，而不用于限定由權利要求書所界定的本發明范圍。