[發明專利]CLC基因的特異性引物在制備用于檢測慢性鼻竇炎伴鼻息肉亞型的試劑盒的應用

有效

• 申請號: 201810717444.5
• 申請日: 2018-07-03
• 公開（公告）號: CN108707661B
• 公開（公告）日: 2021-03-23
• 發明（設計）人: 張羅;王成碩;閆冰;劉暢
• 申請（專利權）人: 張羅;王成碩;閆冰;北京市耳鼻咽喉科研究所;首都醫科大學附屬北京同仁醫院
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6851
• 代理公司: 北京智匯東方知識產權代理事務所(普通合伙) 11391
• 代理人: 康正德;陳智勇

1.一種CLC基因的特異性引物在制備用于檢測慢性鼻竇炎伴鼻息肉亞型的試劑盒的應用，其特征在于：所述試劑盒包括CLC基因的特異性引物。

2.根據權利要求1所述的CLC基因的特異性引物在制備用于檢測慢性鼻竇炎伴鼻息肉亞型的試劑盒的應用，其特征在于：所述CLC基因的上游引物如SEQ ID NO:2所示，所述CLC基因的下游引物如SEQ ID NO:3所示。

3.根據權利要求1所述的CLC基因的特異性引物在制備用于檢測慢性鼻竇炎伴鼻息肉亞型的試劑盒的應用，其特征在于：所述試劑盒進一步還包括內參基因的特異性引物。

4.根據權利要求3所述的CLC基因的特異性引物在制備用于檢測慢性鼻竇炎伴鼻息肉亞型的試劑盒的應用，其特征在于：所述內參基因為GAPDH，所述GAPDH的上游引物如SEQ IDNO:4所示，所述GAPDH的下游引物如SEQ ID NO:5所示。

5.根據權利要求3所述的CLC基因的特異性引物在制備用于檢測慢性鼻竇炎伴鼻息肉亞型的試劑盒的應用，其特征在于：所述試劑盒進一步還包括：從鼻息肉組織或從鼻黏膜脫落細胞中提取RNA的試劑；將總RNA逆轉錄為cDNA的試劑；采用定量聚合酶鏈反應將cDNA中的CLC基因和內參基因進行實時熒光定量PCR反應的試劑。

6.根據權利要求5所述的CLC基因的特異性引物在制備用于檢測慢性鼻竇炎伴鼻息肉亞型的試劑盒的應用，其特征在于：

所述將總RNA逆轉錄為cDNA的試劑包括：逆轉錄混合液和去RNA酶及去DNA酶的水；

采用定量聚合酶鏈反應將cDNA中的CLC基因和內參基因進行實時熒光定量PCR反應的試劑包括：PCR預混合液、雙蒸水、機器熒光補償及矯正劑、CLC基因的上游引物、CLC基因的下游引物、內參基因的上游引物和內參基因的下游引物。

7.根據權利要求5所述的CLC基因的特異性引物在制備用于檢測慢性鼻竇炎伴鼻息肉亞型的試劑盒，其特征在于：所述從鼻息肉組織或從鼻黏膜脫落細胞中提取RNA的試劑包括：RNA抽提液、氯仿、異丙醇、濃度為65％～90％的乙醇、去RNA酶及去DNA酶的水。

8.根據權利要求5所述的CLC基因的特異性引物在制備用于檢測慢性鼻竇炎伴鼻息肉亞型的試劑盒的應用，其特征在于：所述從鼻息肉組織中提取RNA的試劑包括：細胞裂解液、用于去除吸附有RNA的純化柱的雜質的第一緩沖液、用于去除吸附有RNA的純化柱的雜質和鹽分的第二緩沖液和去RNA酶及去DNA酶的水；從鼻息肉組織中提取RNA的工具包括RNA純化柱。

9.根據權利要求8所述的CLC基因的特異性引物在制備用于檢測慢性鼻竇炎伴鼻息肉亞型的試劑盒的應用，其特征在于：所述從鼻息肉組織中提取RNA的試劑還包括DNA酶反應液或所述從鼻息肉組織中提取RNA的工具還包括基因組DNA吸附柱；所述DNA酶反應液包括DNA酶緩沖液、重組DNA酶和去RNA酶的雙蒸水。