[發(fā)明專利]一種二呋喃甲酚紫磺酸內(nèi)酯及其制備方法和使用方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201810714512.2
• 申請日: 2018-06-29
• 公開（公告）號: CN108640909A
• 公開（公告）日: 2018-10-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱坤福;祝蕾;朱曉肸
• 申請（專利權(quán)）人: 山東朱氏藥業(yè)集團(tuán)有限公司
• 主分類號: C07D411/14
• 分類號: C07D411/14;G01N21/78;G01N21/33
• 代理公司: 北京盛凡智榮知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11616
• 代理人: 劉曉暉

本發(fā)明公開了一種二呋喃甲酚紫磺酸及其制備方法和使用方法，其結(jié)構(gòu)式為本發(fā)明的產(chǎn)物是在溴甲酚紫母核的基礎(chǔ)上，將溴取代為呋喃基團(tuán)而成，保持了溴甲酚紫磺酸內(nèi)酯的檢測功能。本發(fā)明采用呋喃基團(tuán)取代了溴原子設(shè)計(jì)合成二呋喃甲酚紫磺酸內(nèi)酯，其在檢測血清中白蛋白含量的優(yōu)勢在于：首先，改變溴甲酚紫化合物的較差水溶性，提高化合物的水溶性，從而提高了檢測的靈敏度。其次，二呋喃甲酚紫磺酸內(nèi)酯不含有溴原子，減少了溴原子與各類蛋白之間的非特異疏水性結(jié)合，所以二呋喃甲酚紫磺酸內(nèi)酯比染料溴甲酚紫化合物與白蛋白結(jié)合的特異性更好，可以用于測定白蛋白的含量。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物和化學(xué)領(lǐng)域，具體是一種二呋喃甲酚紫磺酸內(nèi)酯。

背景技術(shù)

溴甲酚紫法(BCP法)是一種測定白蛋白含量的方法，這一方法主要建立于1960年代。實(shí)驗(yàn)原理為在pH5.2的緩沖液中，有Brij-35存在時，溴甲酚紫(bromocresol puple，BCP)可與白蛋白結(jié)合形成綠色復(fù)合物，在波長603nm處的吸光度與白蛋白濃度成正比例，與同樣處理的白蛋白標(biāo)準(zhǔn)比較，可求得血清中白蛋白含量。

染料法測定血清中白蛋白的含量，操作簡便，為目前大多數(shù)的臨床試驗(yàn)室采用。然而人體血清中蛋白質(zhì)種類繁多，成分極為復(fù)雜。溴甲酚綠和溴甲酚紫兩種相似的染料除與血清白蛋白結(jié)合發(fā)生顏色反應(yīng)外，還能與血清中其他的蛋白質(zhì)，例如球蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、觸珠蛋白的發(fā)生結(jié)合，引起顏色反應(yīng)。雖然這種結(jié)合沒有白蛋白的結(jié)合速度快、親和力高。但是這就造成了在進(jìn)行臨床血清的檢測中，吸光值增高，白蛋白的檢出值相對真實(shí)值偏高較多，這就為人們的使用帶來了不便。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種二呋喃甲酚紫磺酸內(nèi)酯，以解決上述背景技術(shù)中提出的問題。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種二呋喃甲酚紫磺酸內(nèi)酯，其結(jié)構(gòu)式為

所述二呋喃甲酚紫磺酸內(nèi)酯的制備方法，具體步驟如下：

步驟一，在50mL三口瓶中依次加入1080mg化合物1-溴甲酚紫、1.542g磷酸鉀、327mg四(三苯基膦)鈀和580mg 3-呋喃硼酸，然后加入20ml N,N—二甲基甲酰胺和4ml水，在惰性氣體保護(hù)下加熱至100攝氏度，進(jìn)行TLC監(jiān)控反應(yīng)進(jìn)程并且展開劑中石油醚和乙酸乙酯的體積比為5:1,6小時后停止反應(yīng)，得到第一反應(yīng)液；

步驟二，將第一反應(yīng)液進(jìn)行濃縮蒸干，然后用乙酸乙酯萃取3次，合并有機(jī)層并用無水硫酸鈉干燥，過濾后濃縮蒸干，進(jìn)行Flash分離后得到白色固體，即為成品，整個反應(yīng)過程為

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：惰性氣體采用氬氣或者氦氣中的一種。

所述二呋喃甲酚紫磺酸內(nèi)酯在測定血清中白蛋白的含量中的使用方法，具體步驟如下：

步驟一，配置0.1mol/L的二呋喃甲酚紫磺酸內(nèi)酯溶液；

步驟二，稱量不同的白蛋白，溶于一定的PBS緩沖液，配置成不同濃度的白蛋白溶液，另外，配置0.3g/L與3.5g/L的質(zhì)控白蛋白溶液；

步驟三，將20μL白蛋白溶液與200μL的二呋喃甲酚紫磺酸內(nèi)酯溶液進(jìn)行混勻；

步驟四，室溫下孵育5分鐘；

步驟五，測定610nm的紫外吸光值，根據(jù)吸光值建立白蛋白濃度與吸光值的相關(guān)線；

步驟六，取200μL質(zhì)控品白蛋白溶液與200μL的二呋喃甲酚紫磺酸內(nèi)酯溶液進(jìn)行混勻5分鐘，測定其在610nm的吸光值，根據(jù)步驟五的相關(guān)線，測定質(zhì)控品白蛋白溶液的濃度。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：不同濃度的白蛋白溶液為0g/L,0.5g/L,1.0g/L,1.5g/L,2.0g/L,3.0g/L,4.0g/L,5.0g/L的白蛋白溶液。