[發明專利]一種有效分解水稻秸稈的生物制劑及其制備方法

在審

• 申請號: 201810714004.4
• 申請日: 2018-06-29
• 公開（公告）號: CN108841750A
• 公開（公告）日: 2018-11-20
• 發明（設計）人: 江瀚;江旸
• 申請（專利權）人: 上海創博生態工程有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/18;C12N1/14;C05G3/04;C05F17/00;C12R1/125;C12R1/11;C12R1/865;C12R1/01;C12R1/885;C12R1/685
• 代理公司: 上海申新律師事務所 31272
• 代理人: 俞滌炯

1.一種有效分解水稻秸稈的生物制劑，其特征在于，由菌種培養物和載體按照(20-40％)：(60-80％)的重量百分比組成；

其中，所述菌種培養物中各個菌種按照重量百分比的組成為：

2.根據權利要求1所述的一種有效分解水稻秸稈的生物制劑，其特征在于，所述載體中各組分按照重量百分比的組成為：

3.根據權利要求2所述的一種有效分解水稻秸稈的生物制劑，其特征在于，所述載體還包括麥麩和米糠。

4.根據權利要求1所述的一種有效分解水稻秸稈的生物制劑，其特征在于，所述枯草芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、啤酒酵母菌和根瘤菌組成第一菌種培養物，所述綠色木酶和黑曲霉組成第二菌種培養物，所述第一菌種培養物和第二菌種培養物的重量比例為2:1。

5.一種如權利要求1-4中任意一項所述的生物制劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟一，制備由枯草芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、啤酒酵母菌和根瘤菌組成的第一菌種培養物；

步驟二，制備由綠色木酶和黑曲霉組成的第二菌種培養物；

步驟三，將上述制備得到的第一菌種培養物和第二菌種培養物按照2:1混合得到菌種培養物，將所述菌種培養物與載體按比例混合后過60-100目篩，得到有效分解水稻秸稈的生物制劑。

6.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟一中第一菌種培養物的制備過程包括以下步驟：

第一步，將第一液體培養基在115-130℃滅菌15-30分鐘后以100：0.3—0.5混合以下菌液，將枯草芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌和啤酒酵母菌的混合物按重量比1：50-100的比例接種于上述第一液體培養基混合物中，在25-35℃以150-300轉/分的速度攪拌15-25分鐘后密閉靜置發酵3-5天，抽樣檢測菌體生長情況和測定PH值，當顯微鏡下活菌總濃度數超過10億/ml且PH值達到3-4時停止發酵；所述第一液體培養基由以下重量分計的原料組成：豆粕粉3-5％，大豆粉2-4％，玉米粉1-2％，碳酸氫銨0.01-0.3％，糖蜜2-10％，磷酸二氫鉀1.2-2％，硫酸鎂0.01-0.8％，硫酸錳0.001-1％和無菌水74.9-90.8％；

第二步，在發酵罐中將第二液體培養基在115-130℃滅菌15-30分鐘，開始通入空氣，每分鐘通入氣體的體積與發酵罐的體積比為1：20，將根瘤菌按重量比1：50-100接種于第二液體培養基中，在25-35℃以150-300轉/分的速度攪拌15-25分鐘后靜置發酵，抽樣檢測菌體生長情況，當顯微鏡下活菌總濃度超過10億/ml，停止通入空氣，停止發酵；所述第二液體培養基由以下重量分計的原料組成：甘露醇10-20％，豆粕粉2-10％，糖蜜2-10％，玉米粉2-10％，磷酸二氫鉀0.5-1％，磷酸二氫鈉1-2％，硫酸鎂0.3-1％和無菌水46-82.2％；

第三步，分別將第一步和第二步所得的菌種培養物以2000-4000轉/分的轉速離心5-25分鐘，并在42-45℃干燥10-12小時使含水量降低到30％以下。

7.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟二中第二菌種培養物的制備過程包括以下步驟：

第一步，挑取長勢良好的黑曲霉斜面孢子接入麩曲瓶培養基，塞上棉塞并包扎好牛皮紙，用力搖勻，30-35℃下培養6-7天，孢子長滿培養基后冷藏備用；其中，所述麩曲瓶培養基由以下重量分計的原料組成：麩皮60％、玉米芯35％、硫酸銨3％、磷酸二氫鉀2％；

第二步：挑取綠色木霉斜面孢子共同接入種子瓶培養基，扎好紗布，30-35℃下搖床培養48小時；其中，所述種子瓶培養基由以下重量分計的原料組成：蔗糖2％、地瓜汁2％、蛋白胨2％、硫酸銨0.6％、磷酸二氫鉀0.3％、硫酸鎂0.3％；

第三步：將培養結束后的液體種子接種121℃高壓滅菌的淺盤固體發酵培養基，攪拌均勻，30-35℃培養8-10天；其中，所述淺盤固體發酵培養基由以下重量分計的原料組成：麩皮50-80％、稻草粉25-50％、硫酸銨1-5％、磷酸二氫鉀1-5％、碳酸鈣1-5％、硫酸鎂0.1-1％、氯化鈣0.1-1％、氯化鈉0.1-1％。