[發明專利]錳摻雜硒化鎘增強鎢酸鉍-硫化鎘β淀粉樣蛋白的競爭型光電化學傳感器的制備方法

有效

• 申請號: 201810707272.3
• 申請日: 2018-07-02
• 公開（公告）號: CN109060905B
• 公開（公告）日: 2020-08-04
• 發明（設計）人: 魏琴;徐芮;張勇;吳丹;王超;杜斌
• 申請（專利權）人: 濟南大學
• 主分類號: G01N27/30
• 分類號: G01N27/30;G01N27/327;G01N33/531
• 代理公司: 濟南譽豐專利代理事務所(普通合伙企業) 37240
• 代理人: 高強

1.基于錳摻雜硒化鎘增強鎢酸鉍-硫化鎘β淀粉樣蛋白的競爭型光電化學傳感器的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）花狀鎢酸鉍材料的制備

取0.5 ~ 1.0 g鎢酸鈉溶于30 mL水中得溶液A；取1.0 ~ 3.0 g硝酸鉍溶于10 ~ 30 mL水中，得溶液B；將A和B兩溶液混合均勻后，轉入高壓反應釜中，在140 ~ 200 °C下反應16 ~24 h，反應結束后，自然冷卻，產物用無水乙醇和超純水各洗滌3次，在30 ~ 50 °C下真空干燥10 ~14 h，制得花狀鎢酸鉍材料；

（2）硫化鎘量子點的制備

取0.3 ~ 0.5 g九水合硫化鈉溶解于10 ~ 30 mL超純水中，取0.4 ~ 0.5 g乙酸鎘溶解于10 ~ 30 mL超純水中；將兩溶液混合均勻后，轉入反應釜中，在160 ~ 200 °C條件下水熱反應20 ~ 24 h，冷卻至室溫后，所得產物用無水乙醇和超純水各洗滌3次，在40 ~ 60 °C下真空干燥12 h，制得硫化鎘量子點；

（3）錳摻雜硒化鎘納米材料的制備

取0.05 ~ 0.1 g氯化鎘和0.001 ~ 0.002 g氯化錳溶解于20 ~ 50 mL超純水后，加入40 ~ 60 μL 3-巰基丙酸，攪拌5 min后，用1 M的氫氧化鈉溶液調節溶液pH至6 ~ 10，得溶液A；取0.03 ~ 0.06 g硒粉和0.3 ~ 0.4 g硼氫化鈉與3 ~ 7 mL超純水共溶，在N₂氣氛下持續攪拌至澄清，得溶液B；將溶液B迅速倒入溶液A中，攪拌10 ~ 30 min后，轉入反應釜中，于150 ~ 200 °C下反應30 ~ 60 min；反應結束后自然冷卻至室溫，用無水乙醇和超純水洗滌，之后在40 ~ 60 °C下真空干燥10 ~ 12 h，制得錳摻雜的硒化鎘納米材料；

（4）錳摻雜的硒化鎘標記的β淀粉樣蛋白抗原的制備

取2 ~ 6 mg錳摻雜的硒化鎘固體溶于1 mL pH為7.0的PBS緩沖溶液中，之后加入10 ~20 mg 1-乙基-(3-二甲基氨基丙級)碳二亞胺鹽酸鹽，于室溫下震蕩10 ~ 30 min，之后加入300 ~ 800 μL濃度為5 ~ 20 μg/mL的β淀粉樣蛋白抗原，在10 ~ 40 °C下孵化1 ~ 5 h后，在4 °C冰箱中放置10 ~ 15 h，離心，洗滌，溶解于2mL的PBS緩沖溶液中儲存備用；

（5）光電化學傳感器的制備

1）將導電玻璃依次用洗衣粉、丙酮、乙醇和超純水超聲清洗，氮氣吹干；

2）取6 μL、2 ~ 6 mg/mL的鎢酸鉍水溶液滴加到ITO導電玻璃的導電面，紅外燈下晾干；

3）在修飾的電極表面繼續滴加6 μL、2 ~ 6 mg/mL的硫化鎘水溶液，自然晾干；

4）在修飾電極表面滴加體積比為1:1的10 ~ 50 mg/mL的1-乙基-(3-二甲基氨基丙級)碳二亞胺鹽酸鹽和5 ~ 30 mg/mL N-羥基琥珀酰亞胺的混合液4 μL；超純水沖洗電極表面，室溫下自然晾至濕潤薄膜狀態；

5）滴加4 μL、5 ~ 20 μg/mL的β淀粉樣蛋白抗體，超純水清洗，室溫下自然晾至濕潤薄膜狀態；

6）滴加3 μL、用pH為7.0的PBS緩沖溶液配置的質量分數為1% ~ 3%的牛血清白蛋白溶液于修飾電極表面，超純水沖洗電極表面，4 ℃冰箱中晾干；

7）滴加6 μL、體積比為1：1的0.2 pg/mL ~ 50 ng/mL β淀粉樣蛋白抗原和錳摻雜的硒化鎘標記的β淀粉樣蛋白抗原混合溶液，超純水沖洗電極表面，4 ℃冰箱中自然晾干，制得一種檢測β淀粉樣蛋白抗原的光電化學傳感器。

2.如權利要求1所述制備方法制備得到的光電化學傳感器的檢測方法，其特征在于，步驟如下：

（1）使用電化學工作站以三電極體系進行測試，飽和甘汞電極為參比電極，鉑絲電極為輔助電極，制備的ITO修飾的傳感器為工作電極，在10 mL、pH 5.0 ~ 8.0的PBS，0.01 ~ 0.5mol/L的抗壞血酸緩沖溶液中進行測試；

（2）用時間-電流法對β淀粉樣蛋白抗原進行檢測，設置電壓為-0.1 ~ 0.1 V，運行時間120 s，光源波長為400 ~ 450 nm；

（3）電極放置好之后，每隔20 s開燈持續照射20 s，記錄光電流，繪制工作曲線；

（4）將待測的β淀粉樣蛋白抗原樣品溶液代替β淀粉樣蛋白抗原標準溶液進行檢測。