[發明專利]人源化單克隆抗體、其制備方法及其用途

有效

• 申請號: 201810705367.1
• 申請日: 2018-07-02
• 公開（公告）號: CN110669770B
• 公開（公告）日: 2022-07-12
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 盛禾（中國）生物制藥有限公司
• 主分類號: C12N15/13
• 分類號: C12N15/13;C12N5/10;C07K16/28;A61K39/395;A61P35/00;A61P37/02;A61P29/00;A61P35/02;A61P19/02;A61P25/00;G01N33/68;G01N33/574
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1.編碼抗人CD20人源化單克隆抗體SH006-2的核酸分子，其特征在于包含編碼輕鏈的核苷酸序列和編碼重鏈的核苷酸序列；編碼輕鏈的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，編碼重鏈的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

2.權利要求1的核酸分子，其在編碼輕鏈的核苷酸序列和編碼重鏈的核苷酸序列的5’端分別包含編碼信號肽的核苷酸序列；在編碼輕鏈的核苷酸序列和編碼重鏈的核苷酸序列的3’端分別包含終止密碼子。

3.權利要求2的核酸分子，其中所述信號肽由氨基酸序列SEQ ID NO:6組成。

4.重組載體，其包含權利要求1-3任一項的核酸分子，其中所述核酸分子與一種或多種調節元件可操作連接。

5.重組細胞，其含有權利要求4所述的重組載體。

6.根據權利要求5所述的重組細胞，所述重組細胞為敲除負責編碼巖藻糖基轉移酶8即FUT8的基因的CHO細胞。

7.根據權利要求6所述的重組細胞，所述敲除是指利用CRISPR/Cas9基因編輯技術將CHO細胞中編碼FUT8的基因敲除。

8.一種抗人CD20人源化單克隆抗體SH006-2的制備方法，其特征在于，所述單克隆抗體SH006-2由權利要求1-3任一項所述的核酸分子、權利要求4所述的重組載體或者權利要求5所述的重組細胞制備得到，并且所述抗體的輕鏈氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，其重鏈的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示，所述制備方法包括在使得所述抗人CD20人源化單克隆抗體SH006-2表達的條件下培養權利要求5所述的重組細胞，并收集所表達的抗體SH006-2。

9.如權利要求8所述的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)將權利要求1-3任一項所述的核苷酸序列克隆入表達載體中，得到重組表達載體；

2)將重組表達載體轉入宿主細胞，即負責編碼巖藻糖基轉移酶8即FUT8的基因被敲除的CHO細胞中，得到重組細胞；

3)在篩選培養基上對重組細胞進行加壓篩選，得到穩定生長的細胞池；

4)從步驟3)的細胞池中篩選高表達細胞株，然后檢測單克隆上清中SH006-2的表達水平，篩選培養得到表達量較高的克隆，擴增培養后凍存細胞備用；

5)取步驟4)獲得的克隆細胞于目標培養基中培養，檢測抗體表達產量；然后挑選出表達高的克隆進行培養，獲得高表達的單克隆細胞株，收獲培養上清并純化，得權利要求8所述的抗人CD20人源化單克隆抗體SH006-2。

10.如權利要求9所述的制備方法，其特征在于，步驟2)中所述敲除是指，利用CRISPR/Cas9基因編輯技術將CHO細胞中負責編碼巖藻糖的基因即FUT8基因敲除。

11.權利要求1-3任一項所述的核酸分子或權利要求4所述的重組載體或者權利要求5-7任一項所述的重組細胞在權利要求8所述的抗人CD20人源化單克隆抗體SH006-2的制備方法中的用途。