[發(fā)明專利]一種外周血染色體專用真空采集管及染色體制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810703592.1
• 申請(qǐng)日: 2018-06-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108535073A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-09-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 韋朔峰;徐玉嬋;謝莉;韋德寧;韋小妮;陸碧玉;羅穎花;王文丹;何萍;李亞星;覃宋強(qiáng);韋相;鐘鑫;陳建媛;李映艷;覃江鋒
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 柳州市婦幼保健院
• 主分類號(hào): G01N1/28
• 分類號(hào): G01N1/28;C12N5/078
• 代理公司: 柳州市榮久專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 45113
• 代理人: 余航

1.一種外周血染色體專用真空采集管，包括管體（1）和套于管體（1）上部的管帽（2），其特征在于：所述管體（1）底部呈圓錐狀，所述管帽（2）頂面設(shè)第一穿刺孔（3）和第二穿刺孔（4），管帽（2）內(nèi)、管體（1）上方設(shè)橡膠隔層（7），橡膠隔層（7）與管帽（2）內(nèi)頂面之間的空腔為負(fù)壓腔（8）。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種外周血染色體專用真空采集管，其特征在于：所述管帽（2）一側(cè)開(kāi)設(shè)通孔Ⅰ（5），管體（1）上與管帽通孔Ⅰ（5）對(duì)應(yīng)處開(kāi)設(shè)通孔Ⅱ（9），當(dāng)通孔Ⅰ（5）與通孔Ⅱ（9）處于同一方向時(shí)，管體（1）內(nèi)腔與大氣連通。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種外周血染色體專用真空采集管，其特征在于：所述管帽（2）與管體（1）之間為螺紋連接。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種外周血染色體專用真空采集管，其特征在于：所述管體（1）容量為15毫升，管體壁上設(shè)刻度（6）。

5.一種染色體制備方法，其特征在于：它是使用權(quán)利要求4所述的一種外周血染色體專用真空采集管來(lái)實(shí)現(xiàn)標(biāo)本采集和培養(yǎng)同管的人類外周血染色體制備方法，具體步驟如下：

一、制備標(biāo)本采集專用管

（1）取權(quán)利要求4所述的一種外周血染色體專用真空采集管1支；

（2）將通孔Ⅰ與通孔Ⅱ扭至同一方向，通過(guò)通孔Ⅰ和通孔Ⅱ加入培養(yǎng)液，作為標(biāo)本采集專用管；

二、標(biāo)本的采集和培養(yǎng)

（3）采集外周血，通過(guò)穿破第一穿刺孔和橡膠隔層加入步驟（2）所準(zhǔn)備的專用管管體中，輕搖混勻；

（4）將管放入恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)；

（5）培養(yǎng)終止前通過(guò)第二穿刺孔向管中加入秋水仙素，混勻；

（6）繼續(xù)放入恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，得到血液和培養(yǎng)液的混合物；

三、收獲細(xì)胞

（7）將步驟（6）得到的混合物從培養(yǎng)箱中取出，輕搖混勻，離心，棄去上清；

（8）低滲：向管中加入KCL溶液，混勻后進(jìn)行水浴；

（9）細(xì)胞預(yù)固定：向管中加入固定液，輕搖混勻，靜置后進(jìn)行離心；

（10）細(xì)胞固定：將管取出，棄去上清，加入固定液，靜置后進(jìn)行離心，重復(fù)本步驟三次；

四、制片

（11）將管取出，棄去上清，加入適量固定液，混勻成細(xì)胞懸液；

（12）將細(xì)胞懸液滴于玻片中央；

（13）對(duì)玻片進(jìn)行烘烤，G顯帶，用于染色體核型分析的染色體標(biāo)本制備完成。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的染色體制備方法，其特征在于：所述步驟（2）中，加入的培養(yǎng)液為5ml，得到的標(biāo)本采集專用管在不立即使用時(shí)，放入－20℃環(huán)境下進(jìn)行保存?zhèn)溆茫褂们皬?fù)溶至室溫，再行采集標(biāo)本。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的染色體制備方法，其特征在于：所述步驟（4）中，將管斜立于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)66-72小時(shí)，所述步驟（6）中，繼續(xù)放入37oC恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)0.5～1.5小時(shí)。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的染色體制備方法，其特征在于：所述步驟（7）中，在輕搖混勻后，1800r/min離心6～10分鐘，所述步驟（8）中，向管中加入5ml已預(yù)溫至37oC的0.075mol/LKCL溶液，混勻后，37oC水浴25～35分鐘，所述步驟（9）中，向管中加入0.5ml新鮮固定液，輕搖混勻，靜置4～6分鐘，1800r/min離心6～10分鐘，所述步驟（10）中，加入5ml新鮮固定液，靜置5～10分鐘，1800r/min離心6～10分鐘。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的染色體制備方法，其特征在于：所述步驟（13）中，將玻片置于75～80oC環(huán)境下烘烤2.5～3.5小時(shí)。